Therapeutic Potential of Adipose Tissue-derived Mesenchymal Stem Cells in Acutely Injured Liver in Mice

背景和目的脂肪间充质干细胞作为一种优质的成体干细胞，以来源广泛、易于获取、低免疫原性等良好的生物学特性受到研究者的重视。我们的研究旨在探讨人脂肪间充质干细胞在体内外分化为肝样细胞细胞的机制，并且研究其对裸鼠肝损伤潜在的治疗作用。 研究方法脂肪颗粒Ⅰ型胶原酶消化、贴壁分选法分离获得AT-MSCs；相差显微镜观察细胞形态；CCK-8检测细胞生长动力学；流式细胞仪鉴定CD分子；透射电镜内部结构扫描；成脂、成骨定向诱导。体外诱导AT-MSCs向类肝样细胞分化：以HGF、OSM、EFG、FGF、地塞米松为基础诱导基，基础诱导基中加或者不加血清，通过形态学观察、PAS染色检测血清对诱导分化的影响；基础诱...Background and objective Cell-based therapy is a potential alternative to liver transplantation. The goal of the present study was to examine the in vitro and in vivo hepatic differentiation potential of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (AT-MSCs) and to explore its therapeutic use. With a sufficient and easily obtained supply of adipose tissue as the source of adult stem cells, AT-MSC...学位：医学硕士院系专业：医学院临床医学系_外科学学号：2452007115257

脂肪间充质干细胞诱导向肝系细胞分化

大多数肝脏疾病终末期并发严重肝功能障碍,肝移植是治愈的唯一办法。但是临床可供移植肝来源短缺、移植伦理以及移植后排异问题,限制了肝移植在临床的广泛应用。细胞疗法的出现为肝脏疾病治疗提供了另一种可选途径。干细胞替代治疗或者刺激体内肝脏细胞再生是细胞治疗的主要目标[1]。哺乳动物肝脏可以自身修复或再生,卵圆细胞在肝脏修复过程中扮演重要作用。他们可以向肝实质细胞以及向胆管细胞分化[2]。但在损伤超过肝脏自身修复能力时,我们就希望其他来源的干细胞能替代卵圆细胞修复受损肝脏。到目前为止,其他非肝来源的间充质干细胞,如:骨髓、脐带血、脂肪、胎盘已成功诱导向肝细胞分化[3]。这些成体干细胞的发现以及成功向肝细胞的诱导分化具有深刻意义。人们利用间充质干细胞移植已取得了可喜进展,如:改善了延胡索酸乙酰乙酸水解酶缺陷豚鼠的生存,重建了部分肝脏功能[4];降低了肝毒损伤致肝衰豚鼠的死亡率,这些结果都表明间充质干细胞在治疗肝脏疾病上有很大的潜在应用价值。但是肝脏干细胞来源问题困扰着许多学者,未定型间充质干细胞陆续在其他组织中被发现,如:脐带血、胎肺、脂肪组织等有望解决这一难题。研究者开始把目光转转向其他组织来源间充质干细胞的研究,并成..

人脂肪间充质干细胞的分离培养及其鉴定

背景:人脂肪间充质干细胞在不同的条件下被成功诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、骨骼肌细胞、肝脏细胞等中胚层细胞,同时也可以向其他胚层分化,证明脂肪间充质干细胞是多分化潜能干细胞。目的:探讨人脂肪间充质干细胞的分离、鉴定方法。方法:整形外科吸脂术获得腹部皮下脂肪,0.075%Ⅰ型胶原酶消化,贴壁培养获得人脂肪间充质干细胞,绘制细胞增殖曲线,进行流式细胞、细胞周期、免疫荧光等检测,并验证其是否具有多功能分化潜能。结果与结论:获得形态较均一的长梭形的人脂肪间充质干细胞,细胞增殖良好,有明显的指数生长期,体外能长期培养存活,并保持不分化状态;流式检测细胞高表达CD105、CD90,低表达CD34、CD45;多数细胞周期检测G0/G1期占80%以上。能向成脂、成骨诱导分化。结果表明,实验分离获得的细胞是具有脂肪间充质干细胞特性的细胞,为深入研究人脂肪间充质干细胞打下基础

TLR4的表达与急性胆道梗阻时内毒素致小鼠肝脏损伤的关系

目的探讨急性胆道梗阻时内毒素损伤小鼠肝脏的机制及其与TLR4表达的关系。方法雄性C57BL/10J(WT)小鼠42只,随机分为生理盐水组(NS组,n=21)、内毒素处理组1(LPS1组,n=21),C57BL/10ScnJ(TLR4-/-)小鼠21只,为内毒素处理组2(LPS2组)。3组均行胆总管结扎术,LPS1、LPS2组小鼠于胆总管内注射LPS(8ng/μL,10ng/g体重),NS组注射同等剂量的生理盐水,术后6、12、24h采集标本,RT-PCR检测肝脏组织TLR4mRNA的表达情况,全自动生化分析仪检测血清ALT、TBIL、DBIL水平,ELISA法检测血清TNF-α、IL-6的水平。病理观察肝脏损伤情况,免疫组织化学染色观察肝脏NF-κB的表达。结果 LPS1组与NS组比较肝脏组织TLR4mRNA在6h时表达已有升高,于24h达高峰,ALT、TBIL各时点均明显升高(P<0.01),TNF-α、IL-6表达亦增高(P<0.01),LPS1病理损伤程度较NS组重,免疫组化显示术后24小时NF-κB在LPS1组可见肝细胞明显的核表达。LPS2组与LPS1组比较各血清学指标均明显下降,病理损伤减轻,24h时肝细胞NF-κB核表达较少。结论在急性胆道梗阻时LPS可以加重肝脏组织损伤和机体炎症反应,可能与TLR4的表达增高及NF-κB的表达有关。阻断LPS-TLR4信号通路可以减轻LPS引起的机体损伤