Construction the panel of H5 subtype influenza virus hemagglutinin (H5 HA) specific monoclonal antibodies and preliminary study on HA antigen drift of H5 subtype influenza virus

2003年至今，东南亚国家持续爆发H5N1禽流感疫情并随着候鸟迁移不断向亚洲、欧洲和非洲国家扩散传播，各国养禽业因此遭受灭顶之灾，同时不断引发的人感染事件也给各国公共卫生工作带来严峻挑战。流感病毒由于变异迅速，不断有新的病毒株出现，导致了对其监控、预防以及治疗存在巨大困难。目前对H5亚型禽流感病毒的变异规律研究是当前流感病毒研究的一个热点，对分析病毒的变异趋势，预测全球流感大流行有重要意义。本研究的目的是建立一个抗H5亚型流感病毒HA蛋白特异性单克隆抗体库，并利用该单抗库试图分析H5亚型流感病毒HA蛋白抗原变异规律。 首先在本实验室已有研究基础上，采用A/Ck/HK/Yu22/02（H5N1...H5N1 subtype Avian Influenza which had been attacked the southern Asian countries has recently spread to many Asian, European, African countries by the migratory birds. The H5N1 virus severely impacted the agricultural economy, led heavy loss of national economy in these countries, and even caused fatal disease on human, therefore threatening all the people in the world. H5N1, likes other influenz...学位：理学硕士院系专业：生命科学学院生物学系_细胞生物学学号：20042608

First report of Gyrodinium fusiforme and G.moestrupii (Dinophyceae) in China Sea waters

甲藻环沟藻属于一类无色素体、表面有脊的裸甲藻,因可捕食一些重要的赤潮生物而在海洋生态系统中扮演着重要的角色。有关中国近海环沟藻属的物种多样性信息非常有限。本文报道了2个新记录种——纺锤环沟藻(gyrOdInIuM fuSIfOrME)和莫氏环沟藻(g.MOESTruPII)。纺锤环沟藻细胞呈纺锤形,长48.0–58.0μM,宽18.0–23.0μM,长宽比为2.4–3.0,和模式种相比体型和长宽比都较小。莫氏环沟藻细胞也呈纺锤形,长约30μM,宽约15μM。我们测定了纺锤环沟藻和莫氏环沟藻大亚基的部分序列,并根据大亚基序列利用最大似然法和贝叶斯法建立了系统发育树。结果显示环沟藻属是单源的,纺锤环沟藻和裂缝环沟藻(g.fISSuM)聚合在一起,但是与螺旋环沟藻(g.SPIrAlE)分离。纺锤环沟藻和莫氏环沟藻分别可以摄食米氏凯伦藻(kArEnIA MIkIMOTOI)和具齿原甲藻(PrOrOCEnTruM dEnTATuM),前者在米氏凯伦藻赤潮中的大量出现显示它可以促进赤潮的消退。The athecate dinoflagellate genus Gyrodinium includes heterotrophic species that prey on other dinoflagellates,and thus play an important role in marine ecology.Information about the Gyrodinium diversity along the coast of China is limited.Here we report on the characteristics of two species,Gyrodinium fusiforme Kofoid & Swezy and Gyrodinium moestrupii Yoon,Kang,and Jeong that were isolated from a Karenia mikimotoi bloom sample in the East China Sea.The cells of G.fusiforme were fusiform with a length of 48.0–58.0 μm and a width of 18.0–23.0 μm.Cells of G.moestrupii were also fusiform and approximately 30 μm long and 15 μm wide.Partial large subunit(LSU) ribosomal DNA sequences were obtained from single cells of G.fusiforme and G.moestrupii and phylogenetic trees were built using maximum likelihood(ML) and Bayesian inference(BI).In the phylogenetic trees the genus Gyrodinium is monophyletic,and G.fusiforme groups together with G.fissum,but separates from G.spirale although they are similar in morphology.G.fusiforme and G.moestrupii can prey on Karenia mikimotoii and Prorocentrum dentatum respectively.The high abundance of G.fusiforme during K.mikimotoi bloom suggests it may play a role in bloom decline.福建省自然科学基金(2012J01135

痛觉感受相关的TRP离子通道蛋白研究进展

疼痛是机体对外界伤害性刺激产生的一种不愉快感觉,与临床上包括癌症、糖尿病、关节炎等在内的多种疾病的病理过程相关。瞬变感受器离子通道蛋白是一类非选择性阳离子通道蛋白超家族,目前已有七个亚族、30多个成员在哺乳动物中被相继发现。近年研究表明TRPV亚家族中TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV4以及TRPM亚家族中TRPM8和TRPA亚家族中TRPA1与痛觉的产生关系密切。本文主要对上述离子通道与各种伤害性刺激引起的痛觉增敏的病理机制进行简要综述

一种新型H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂的建立

利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒检测均为阳性,对多数毒株的分析灵敏度优于0.1个血凝滴度(HA titer),其中部分优于0.01个血凝滴度;比较该试剂与早期开发的同类ELISA试剂,发现前者对后者未能检出的H5N1新变异株检测均为阳性;利用该试剂和商品化Directigen Flu A(BD)试剂检测两株H5N1病毒株,提示前者灵敏度高于后者;该试剂对一株H5N1病毒的检测灵敏度与标准RT-PCR相当;该试剂对24株非H5亚型病毒检测均为阴性,显示出良好特异性。以上结果提示,此研究建立的H5N1病毒抗原快速检测试剂在H5禽流感现场检测上具有较好的应用前景

分子对接预测H5亚型禽流感病毒的广谱中和表位

H5N1禽流感病毒已经在亚洲、欧洲和非洲广泛传播,造成了巨大损失.最近我们鉴定出一株对多种来源的H5N1代表株均有良好中和活性的、识别H5亚型血凝素(hemagglutinin,HA)的广谱单克隆抗体8H5,它对寻找克服禽流感高变性的广谱治疗性抗体、疫苗和药物具有重要价值.本研究应用分子模拟技术,采用"典范结构"方法对8H5抗体Fab片段进行结构模建,并通过能量分析、SAS值分析、"拉曼强传图"检验、profile-3D分析等理论验证,获得较为合理的8H5Fab的三维空间结构.8H5Fab与3种HA蛋白晶体结构的分子对接结果表明,8H5抗体与HA蛋白的作用模式与HA宿主来源无关,但与HA结构的亚型相似性相关.综合抗原同源比对结果,推测8H5抗体识别的广谱中和表位是由HA上的Asp68,Asn72,Glu112,Lys113,Ile114,Pro118,Ser120,Tyr137,Tyr252不连续氨基酸残基组成的构象表位.这一模型将为H5亚型禽流感病毒广谱疫苗和治疗性药物的分子设计提供依据

肝癌发展中FasL及其受体Fas/DcR3的表达分析

目的研究小鼠肿瘤发生早期肿瘤坏死因子超家族成员FasL及其受体的表达特点,及其与免疫调节相关分子表达的时空关系,探讨其在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法建立小鼠实体瘤模型,采用RT-PCR方法检测肿瘤组织中可溶型FasL、Fas及DcR3、TGF-β、IL-10在肿瘤发生不同时相的表达,同时,应用ELISA方法定量检测血清中TGF-β、IL-10的表达。结果在早期的肿瘤组织中,Fas的表达先于DcR3,其后DcR3大量表达,而Fas的表达则下调直至丢失,DcR3、FasL同时表达并上调,TGF-β和IL-10也随肿瘤的表达而上调。TGF-β同DcR3的表达具有空间位置的一致性。FasL、DcR3、TGF-β和IL-10的表达水平同肿瘤的生长呈正相关。结论随着肿瘤不断的生长,肿瘤局部的免疫应答逐渐趋向于负调节,FasL、DcR3在诱导肿瘤免疫耐受的过程中可能发挥着重要作用

H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂对不同现场标本的检测比较

利用H5亚型禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂“H5-HA(Ag)Dot-ELISA(H5-Dot)”对来自陆禽、水禽的484份气管拭子、泄殖腔拭子和粪便拭子标本进行检测,结果:①不同采集方式的H5N1阳性标本的检出率高低有别,气管拭子的检出率最高,泄殖腔拭子次之,粪便拭子最低(P<0·05),因此建议现场采样时应尽可能采集气管拭子标本;②陆禽标本检出率显著高于水禽标本(P<0·05),对病毒培养阳性的陆禽气管拭子检出率达80%(95%CI:70·6%~87·8%),对水禽气管拭子标本的检出率为38%(95%CI:26·9%~49·4%),可能与标本中病毒滴度高低有关;③有症状与无症状陆禽标本的检出率无显著差异。另外,H5-Dot试剂对333份非H5病毒气管拭子标本的特异性为99·4%(95%CI:97·9%~99·9%)。这些结果表明,H5-Dot是一种较为可靠的H5亚型禽流感病毒早期快速检测方法,在缺乏仪器设施和高素质专业技术人员的H5N1禽流感病毒防控第一线具有重要推广价值

小槐花的化学成分研究

目的:系统研究中药小槐花中的化学成分。方法:利用大孔树脂,Sephadex LH-20,ODS及正相硅胶柱等色谱手段进行分离,通过多种波谱学数据分析进行化合物的结构鉴定。结果:从小槐花60%乙醇提取物中分离得到15个化合物,经结构鉴定分别为豆甾醇(1),β-谷甾醇(2),柠檬酚(3),黄槿酮A(4),异柠檬酚(5),kenusanone I(6),neophellamuretin(7),清酒缸酚(8),古柯三醇(9),黄槿酮D(10),山柰酚(11),8-prenylquercetin(12),leachianone G(13),5,7,4'-三羟基-二氢黄酮醇(14),4H-1-benzopyran-4-one,2-(3,4-dihydroxyphenyl)-2,3-dihydro-3,5,7-trihydroxy-8-(3-methyl-2-butenyl)-,(2R-trans)-(9CI)(15)。结论:除化合物8外,所有化合物均为从该种植物中首次分离得到

适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础

一株抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的广谱中和活性

以H5N1禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02作为抗原,应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5,单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性。选择33株2002~2006年不同地域,不同宿主中分离的不同遗传变异亚系的H5N1病毒代表株,对单抗8H5分别进行血凝抑制实验及中和试验分析,结果显示单抗8H5对所有H5亚型病毒均有较强反应,而对非H5亚型标准病毒株均不反应,说明8H5是一株广谱性抗H5特异性中和单抗,并提示单抗8H5的HA识别表位可能是一个相当保守的中和表位。并且单抗8H5双抗夹心系统的初步评价显示了其在诊断应用上的前景