Cloning and Expression of D-like Aspartic Protease of Anisakis simplex

作者单位： 厦门大学生命科学院， 厦门361005 通讯作者， E-mail:[email protected][中文文摘]目的克隆简单异尖线虫Ⅲ期幼虫(L3)的D-天冬氨酸蛋白酶基因(AsAP)全长,研究其表达蛋白的特性。方法根据GenBank中简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因表达序列标签的部分信息,设计特异引物并用cDNA末端快速扩增技术得到AsAP全长序列,分析推导的蛋白序列特征,并预测其三级结构。用RT-PCR扩增简单异尖线虫L3的AsAP基因编码序列,产物用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,连入表达载体pET32а(+),转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果简单异尖线虫L3的AsAP基因全长1 753 bp,编码453个氨基酸,与锡兰钩虫(Ancylostoma ceylanicum)的D-天冬氨酸蛋白酶相似性达65%。该蛋白具有两个保守的催化域,1个活性中心翼环,S2和S3亚位点各1个;具有由20个氨基酸组成的N端信号肽,构成疏水性强的跨膜域。不同浓度的IPTG(0.2～1.6 mmol/L)诱导对AsAP表达的影响较小,1.0 mmol/LIPTG诱导2 h后表达量达到最高水平。结论克隆并表达了简单异尖线虫的D-天冬氨酸蛋白酶。[英文文摘]Objective To clone and express the full length of D-like aspartic protease gene(AsAP) of the third stage larvae of Anisakis simplex.Methods According to the partial information of D-like aspartic protease encoding gene of A.simplex from GenBank,specific primers were designed to amplify 3′end and 5′ end of AsAP gene using rapid amplification of cDNA ends(RACE),and the full length of the D-like aspartic protease gene was obtained.Using total RNA of the third-stage larvae of A.simplex,coding sequence of the AsAP gene was amplified by reverse transcription-PCR(RT-PCR).The PCR product was digested by EcoRⅠ and SalⅠ,and cloned into pET32 vector.The recombinant plasmid was checked by double enzyme digestion and sequencing,and the positive recombinant plasmid was transformed into E.coli BL21(DE3).Expression of the protein induced by IPTG under gradient concentration and different time was conducted.Result A 1 753 bp full length of AsAP was obtained,which contained 30 bp 5′UTR,361 bp 3′UTR and a 1 362 bp open reading frame(ORF) encoding 453 amino acids with a predicted molecular mass of Mr 50 726.It showed 65% identity with the D-like aspartic protease of Ancylostoma ceylanicum.The predicted amino acid sequence contains two conserved catalytic motif,an active site flap,an S2 subsite and an S3 subsite.A 20 amino acids signal peptide was found in the N-terminus,with significant hydrophobic property.Different concentration of the IPTG(0.2~1.6 mmol/L) showed little effect on the expression,and the production of the protein was up to maximum after 2 hours induction.Conclusion The AsAP gene has been cloned and expressed.国家自然科学基金(No.81171595);福建省自然科学基金(No.2010J01229

鲁棒自适应概率加权主成分分析

主成分分析(Principle component analysis, PCA)是处理高维数据的重要方法.近年来,基于各种范数的PCA模型得到广泛研究,用以提高PCA对噪声的鲁棒性.但是这些算法一方面没有考虑重建误差和投影数据描..

2011中国戏剧的孟冰年

由文化部艺术司、总政宣传部艺术局和中国剧协联合主办的孟冰戏剧作品研讨会于2011年11月5日在京召开。总政宣传部副部长黎国如,中国作协党组成员、副主席廖奔,文化部艺术司司长董伟,中宣部文艺局副局长孟祥林,中国剧协分党组副书记、秘书长刘卫红以及胡可、徐晓钟、阎肃、仲呈祥等50位戏剧界专家、学者出席了本次研讨会。与会专家和学者结合刚刚结束的“红旗飘飘——孟冰戏剧作品展演“,对孟冰创作的43部戏剧作品进行了研讨,并对他40多年来潜心深入生活、注重学习、善于借鉴、勤奋写作的态度给予了肯定。孟冰积极寻求对现实主义创作的发展与突破,努力追求现实主义的多样性、包容性和开放性,推出了《毛泽东在西柏坡的畅想》、《寻找李大钊》、《谁主沉浮》等震撼人心的话剧作品,为戏剧舞台表现重大革命历史题材提供了新的成功经验。本刊选发了部分专家学者的文章,以飨读者

Formation of Bow Shock Waves Around a Blunt Body in Magnetohydrodynamics Flows

The diffraction of a shock wave over a stationary body is a problem of interest associated with the starting of shock tubes and expansion tubes, which are well suited to studies of hypersonic magnetohydrodynamic flows. However, these facilities are characterized by very short test times. The transient parameters during the establishment of the detached bow shock in such impulsive facilities are important for both data processing and experimental design. In the present study, based on the low magnetic Reynolds number assumption and dipole magnetic field distribution, the influence of magnetic field on the diffraction of an incident shock wave over a sphere was studied numerically. The incident shock Mach number ranges from 11 to 15 under different magnetic field intensities. Time histories of the shock-detached distance and stagnation pressure were first obtained. Moreover, the time needed to establish the steady flows over the sphere was also displaced against the magnetic interaction parameter. The larger the magnetic interaction parameter, the longer the time needed to establish a steady bow shock for experiments, which further challenges the facilities to have sufficient test times for conducting hypersonic magnetohydrodynamic flow experiments

裸眼填砂工艺在福1X1井堵漏中的应用

福1X1井钻进至奥陶系发生严重恶性漏失，多次采用不同的堵漏方式均未达到要求的效果，为实现下步完井施工作业，需对油层上部进行水泥固井作业，以达到隔离水层的目的。因本井奥陶系灰岩承压能力低，且下部油层仍存在漏失情况无法直接固井。本井采用了石英砂对下部井眼进行充填，使油层上部达到水泥固井的条件，取得了较好的效果。</jats:p

磁流体流动控制对驻点热流的影响

磁流体流动控制是一种利用电磁场与流场相互作用来实现流动控制的主动防热技术,具有广阔的应用前景。本文基于低磁雷诺数模型,结合边界层理论,讨论了球头模型在不同磁场类型、不同磁场强度、不同电导率模型以及考虑真实气体效应下驻点热流的变化规律。研究表明,理想气体模型下,驻点热流的变化直接受驻点附近的速度梯度以及焓值梯度的影响,驻点附近速度梯度随磁场强度的增大而减小,而焓值梯度则随磁场强度的增大而增大,其中速度梯度随磁场的变化要比焓值梯度更为剧烈;不同磁场类型在流场内的能量密度分布差异是导致其磁控效果不同的主要原因;随着磁感应强度的增加,球头驻点热流逐渐减小,但其热防护效果逐渐趋于"饱和";电导率也是影响热防护效果的关键因素,不同电导率模型对驻点附近速度梯度的影响有限,此时焓值梯度随电导率模型的变化是导致磁控差异的主要原因;考虑高温真实气体效应下,驻点热流除了速度梯度以及焓值梯度的影响外,组分扩散项也会随着磁场强度的增大而增大

基于高温气体效应的磁流体流动控制研究进展

高超声速飞行器强激波后高温气体形成具有导电性的等离子体流场,电离气体为磁场应用提供了直接工作环境.磁流体控制技术利用外加磁场影响激波后的离子或电子运动规律,可有效地改善高超声速飞行器气动特性,在飞行器气动力操控和热环境管理等方面均具有广阔的应用前景;同时,超导材料及电磁技术的发展又重新推动了这一领域的研究热潮.虽然国内外在高超声速磁流体流动控制领域已开展了一些研究工作,但其实验研究依然极具挑战,且由于实验条件及测量技术等限制,其压力、热流等参数的测量并没有得出较为系统的结论,因此需要对影响脱体激波距离、热流、压力变化的规律及机理进行深入研究;同时,数值模拟方法和理论分析也亟待可靠的实验数据来对其进行验证.本综述调研和讨论了基于高温真实气体效应的磁流体流动控制技术研究,主要针对磁流体流动控制的试验技术、数值模拟、理论方法以及流动控制的主要研究方向等进行了总结,并对其发展趋势进行了讨论和展望

高超声速MHD球头激波脱体距离理论求解

高超声速飞行器强激波后高温气体形成具有导电性的等离子体流场,电离气体为磁场应用提供了直接工作环境,磁流体流动控制技术利用外加磁场影响激波后的离子或电子运动规律,这可以有效改善高超声速飞行器气动特性.激波脱体距离作为高超声速磁流体流动控制较为直观的气动现象,受到研究者重点关注;磁场添加后激波脱体距离发生变化,其变化幅度直接反映磁控效果,然而基于高超声速磁流体流动控制的相关理论模型较少,需要进一步发展.本文基于低磁雷诺数假设和偶极子磁场分布的条件,通过对连续方程沿径向积分以及对动量方程采用分离变量的方法,推导了高超声速磁流体流动控制下的球头激波脱体距离解析表达式.理论分析结果表明,激波脱体距离随着磁相互作用系数的增加而变大;随着来流速度的增加,磁相互作用系数变为影响激波脱体距离大小的主要因素.本文理论模型可以达到快速评估磁控效果的目的,对高超声速磁流体流动控制实验方案设计和结果分析具有一定的指导意义