종양관련 대식세포에서 유래되는 endotrophin이 갑상선암 미세환경에 미치는 역할에 대한 연구

학위논문(박사) -- 서울대학교대학원 : 의과대학 의학과, 2023. 8. 박도준김재범조선욱.Endotrophin (ETP)은 type VI collagen α3 (COL6A3)에서 C5 domain이 절단되어 생성된 단백질로써, 유방암과 간암의 종양 조직에서 정상 조직과 비교해서 높은 수치를 보이고 있으며 종양의 악성도와 관련이 있음을 보고 하고 있지만 종양 미세환경에서의 ETP의 역할에 대한 연구는 부족하다. 본 연구는 갑상선암 미세환경에서 ETP의 기원 세포를 조사하였고, ETP에 의한 갑상선 암세포의 변화와 갑상선암 미세환경에서 ETP에 의해 조절되는 유전자 및 면역세포의 분석에 대해 기술하였다. 갑상선 암세포로 자극받은 대식세포에서 ETP의 발현이 증가하였다. 또한 ETP에 의해서 갑상선 암세포의 이동능이 증가하였다. ETP를 갑상선 암세포에 처리 후, 변화된 유전자를 확인하기 위한 RNA 시퀀싱 분석 결과에서, 세포 이동과 관련된 유전자들의 발현이 증가하였다. 또한 면역억제를 유도하는 유전자 및 혈관 신생성을 자극하는 유전자도 증가하였다. 반면에 ETP가 처리되지 않은 군에서는 면역활성을 증가시키는 유전자와 종양 억제 유전자의 발현이 증가하였다. 다음으로, 생체내 ETP의 영향을 관찰하기 위해 COL6A3가 결핍된 마우스와 정상 마우스에 각각 갑상선암을 유발하였을 때, COL6A3가 결핍된 마우스에서 갑상선암의 성장이 감소하였다. 종양을 면역화학염색으로 분석한 결과, COL6A3가 결핍된 마우스의 종양에서 세포독성 T 세포가 현저히 증가했다. 또한 종양 RNA의 분석 결과, COL6A3가 결핍된 마우스의 종양에서 면역반응을 유도하는 T 세포와 관련된 유전자의 증가와 종양 억제 역할을 하는 M1 대식세포의 유전자가 증가했다. 이러한 결과를 바탕으로, 갑상선암 미세환경의 M2 대식세포에서 유래되는 ETP가 갑상선암의 공격성을 증가시키고 면역 억제를 유도하여 종양 성장의 친화적인 환경으로 변화시킴을 증명하였다. 따라서 ETP는 대식세포가 풍부한 갑상선암의 좋은 표적 치료제가 될 수 있음을 제안한다.Endotrophin (ETP), a cleaved fragment of the C5 domain of the Type VI collagen α3 (COL6A3), has been shown to play pro-tumorigenic roles in breast and liver cancers. However, the actions of ETP in the tumor microenvironment (TME) remain undetermined. I aimed to investigate the role and mechanism of ETP in the TME of macrophage-enriched thyroid cancer. Mouse thyroid tumors were co-stained with anti-ETP and anti-CD163 antibodies to clarify the origin of ETP in the TME of thyroid cancer. Immunofluorescence staining showed that ETP and anti-CD163 positive macrophages co-localized in the peritumoral area. The protumorigenic functions of ETP have also been studied. Conditioned medium from co-cultures of FRO or BCPAP (human thyroid cancer cell lines) with THP-1 cells (human monocytic cell line) was harvested and then FRO or BCPAP cells were treated with it. Treatment with conditioned medium from co-cultures increased cell migration potentials compared to that of single cells alone, and the anti-ETP neutralizing antibody reduced these effects. Moreover, MMP-9 or MMP-14, the candidates of COL6A3 protease that produces ETP, increased in THP-1 cells by treatment with conditioned medium. Additionally, treatment with conditioned medium from MMP-9 or MMP-14 inhibitor-treated co-cultures of FRO or BCPAP cells and THP-1 cells decreased the cancer cell migration potential compared to the control conditioned medium, and these effects were reversed by treatment with ETP. The RNA-sequencing dataset of ETP-treated FRO cells showed that genes related to cell migration were the most differentially expressed. In an in vivo study, deficiency of Col6a3 resulted in reduced tumor growth. Further, in analyzing immune response in tumors, the mRNA expression of Cd4, Cd8, and Cd80 was increased in COL6A3-KO mice tumors. Taken together, macrophage-derived ETP supports the pro-metastatic potential of human thyroid cancer cells and the immune inhibitory response in the TME.ABSTRACT i CONTENTS iii LIST OF FIGURES vi LIST OF TABLES viii 1. INTRODUCTION 1 1.1. Tumor Microenvironment 1 1.2. Tumor-Associated Macrophages in the Tumor Microenvironment (TME) 3 1.3. Targeting Tumor-Associated Macrophages (TAMs) in the Tumor Microenvironment (TME) 6 1.4. The Thyroid Tumor Microenvironment 8 1.5. Suggested oncogenic role of Collagen Type VI Alpha 3 in Tme 9 1.6. ECM Interactions in the Tumor Microenvironment of Advanced Thyroid Cancer 10 1.7. Aim of the study 12 2. MATERIALS AND METHODS 13 2.1. Animal experiments 13 2.2. Cell culture 13 2.3. Harvest of ETP conditioned medium 14 2.4. Harvest of anti-ETP antibody medium 14 2.5. Preparation of conditioned medium 15 2.6. Immunohistochemistry staining 16 2.7. Immunofluorescent staining 16 2.8. Real-time PCR analysis 17 2.9. Western blotting analysis 17 2.10. Cell migration assay 18 2.11. Cell viability assay 18 2.12. Isolation of bone marrow-derived monocytes/ macrophages 19 2.13. RNA sequencing 20 2.14. Statistical analysis 20 3. RESULTS 23 3.1. Expression and Association of Endotrophin and CD163-positive TAM in Human Thyroid Cancer Tissues 23 3.2. Peritumoral Co-localization of Endotrophin Expressions with CD163-Positive Macrophage Concentration: Evidence from a Syngeneic Mouse Model of ATC 30 3.3. Enhanced ETP Production from Macrophages via Thyroid Cancer Cells-Macrophage Interactions 33 3.4. The effects of ETP on Cell Viability in Thyroid Cancer Cells 36 3.5. The Effects of ETP on Thyroid Cancer Cell Migration 38 3.6. Molecular Mechanism of ETP-Mediated Cancer Cell Migration: Insight from transcriptomic analysis 44 3.7. Comparing Tumor Growth and Microenvironments in an Orthotopic Syngeneic Animal Model using COL6A3-Deficient Mice 49 3.8. ETP Interactions with the Tumor Microenvironment in Human Thyroid Cancer 58 3.9. MMP-9 and MMP-14 dependent production of ETP in macrophages 66 4. DISCUSSION 72 5. REFERENCES 80 국문초록 96 감사의 글 99박

A study on numerical model of clutch actuator for linear control of dry dual clutch system

학위논문(석사)--아주대학교 공학대학원 :기계공학과,2016. 8최근 환경오염과 지구 온난화에 대한 범세계적인 관심으로 온실가스의 배출 규제가 강화되고 있으며, 이 같은 추세에 발맞추어 화석연료 소비 비중이 높은 자동차 산업 분야에서는 차량의 연비를 향상시키기 위한 기술 개발에 열을 올리고 있다. 이러한 행보에 발맞추어 변속기 분야에서는 DCT (Dual Clutch Transmission) 적용을 통한 연비 향상을 도모하고 있다. 본 연구에서는 DCT의 한 종류인 건식 듀얼 클러치(Dry Dual Clutch)의 하중-스트로크 특성을 분석하고, 비선형 물리 시스템을 선형화 시킬 수 있는 클러치 액츄에이터를 고안하였다. 제어 특성 선형화를 위한 클러치 액츄에이터는 2차원 수식 모델과 동력학 해석 모델 그리고 시제품의 실험을 통해 성능을 검증하였으며, 높은 선형성을 확인할 수 있었다. 본 논문은 향후 제어기를 탑재한 차량 기반의 연구에서 유용하게 활용될 것으로 기대되어진다.Ⅰ. 서 론 1 1. 연구 배경 1 2. 연구 동향 4 3. 연구 목적 6 Ⅱ. 건식 듀얼 클러치 시스템 특성 9 1. 건식 듀얼 클러치 시스템 구성 9 2. 건식 듀얼 클러치의 하중 특성 11 Ⅲ. 클러치 액츄에이터 수학적 모델 15 1. 기구 설계의 이론적 접근 15 2. 시스템 선형화 요건과 클러치 액츄에이터 16 3. 전기·기계식 클러치 액츄에이터의 특성 모델 18 3.1 클러치 액츄에이터의 스트로크 관계식 20 3.2 부재의 평형 관계식 23 3.3 액츄에이터 기구부의 선형 대수 방정식 28 Ⅳ. 액츄에이터 수식 모델의 특성 검증 30 1. 2차원 수식 모델 30 2. 동역학 해석 모델 40 Ⅴ. 실험적 검증 43 1. 실험 모델 43 2. 실험 장치 및 방법 46 3. 실험 결과 및 고찰 52 Ⅵ. 결론 55 참고 문헌 57Maste

A Method for Automatic Extract ion of Term Definition from Text

본 연구는 텍스트 코퍼스로부터 용어의 정의를 자동으로 추출하여 용어의 자동 추출기술과 통합하여 다목적의 용어뱅크를 구축하기 위한 목적으로부터 출발하였다. 지식정보의 확산에 따라 기존 전문분야 용어집에 수록되지 알은 용어의 수는 폭발적으로 증가하고 있다. 기존의 용어집 혹은 용어사전의 디지털화만으로는 새로운 전문용어의 포괄성에서 한계가 있는 것이다. 정보의 획득이라는 면에서 보면 이러한 한계를 극복하고 모든 용어에 대해서 즉시적으로 용어의 정의를 제공받는 것이 바람직하다. 자동으로 구축된 용어집의 응용은 여러 가지로 기대된다. 새로운 용어에 대한 의미 파악을 위해서는 물론, 확장된 전문용어집의 작성이나 전문분야 온톨로지의 구축 등에도 이용될 수 있다