표적암치료를 위한 저분자 STAT3 저해제인 옥사디아졸계 ODZ10117의 개발

학위논문 (박사) -- 서울대학교 대학원 : 의과대학 의과학과, 2020. 8. 예상규.STAT3 is a transcription regulator involved in many intracellular functions, including cell proliferation, differentiation, survival, angiogenesis, and immune response. Persistently activated STAT3 is a promising target for a new class of anticancer drug development and cancer therapy, as it is associated with tumor initiation, progression, malignancy, drug resistance, cancer stem cell properties, and recurrence. Here, I discovered 3-(2,4-dichloro-phenoxymethyl)-5-trichloromethyl-[1,2,4]oxadiazole (ODZ10117) as a small molecule inhibitor of STAT3 and suggested that it may have an effective therapeutic utility for the STAT3-targeted cancer therapy. ODZ10117 targeted the SH2 domain of STAT3 regardless of other STAT family proteins and upstream regulators of STAT3, leading to inhibition of the tyrosine phosphorylation and transcriptional activity of STAT3. The inhibitory effect of ODZ10117 on STAT3 was stronger than the known STAT3 inhibitors such as S3I-201, STA-21, and nifuroxazide. Furthermore, I demonstrated the therapeutic efficacy of ODZ10117 by targeting STAT3. ODZ10117 suppressed the cancer cell migration and invasion, induced apoptotic cell death, and reduced tumor growth in both in vitro and in vivo models of breast cancer and glioblastoma. In addition, ODZ10117 suppressed stem cell properties in glioma stem cells (GSCs). To confirm these results, I demonstrated two different types of xenograft model. First, I have shown that extended the survival rate and reduced lung metastasis in models of breast cancer. Next, the administration of ODZ10117 showed significant therapeutic efficacy in mouse xenograft models of GSCs. In conclusion, I believe this study provides insight in to a promising therapeutic candidate for cancers by targeting STAT3.신호변환 및 전사활성인자 3 (STA3)는 많은 종양에서 과발현하고 있으며, 종양 미세 환경에서 STAT3는 다양한 경로를 통해 지속적으로 활성화되며, 일반적으로 지속적으로 활성화된 STAT3는 종양의 형성, 진행, 악성도, 재발 및 약물 저항성, 암 줄기세포 특성과 연관되어 있다. 따라서, STAT3는 암 치료에서 성공 가능성이 매우 높은 단백질로 새로운 종류의 항암제 개발과 암치료에 유망한 표적이다. 이 연구에서 STAT3의 소분자 억제제로서 3-(2,4-디클로로-페녹시메틸)-5-트리클로로메틸-[1,2,4]옥사디아졸 (ODZ10117)을 발견하였고 이는 STAT3 표적 암치료에 효과적인 치료 효용이 있을 수 있음을 시사하였다. 먼저, ODZ10117은 다양한 종류의 암, 특히 유방암과 신경교모세포종에서 STAT3 활성화를 효과적으로 억제하는 것을 확인하였으며, 흥미롭게도 다른 STAT 계열 단백질 및 STAT3 상위 신호전달계에 관계없이 STAT3의 SH2 도메인을 표적으로 하여 STAT3의 타이로신 인산화, 핵 내로의 이동 및 전사 활성을 억제하는 것을 확인하였다. 또한, STAT3에 대한 ODZ10117의 억제 효과는 STAT3 억제제인, S3I-201, STA-21 및 니프록사지드와 같은 잘 알려진 STAT3 억제제 보다 STAT3의 활성화 저해 능력이 뛰어났다. ODZ10117은 암세포의 이동과 침윤을 억제하고, 세포사멸을 유도하였으며, 종양의 성장을 감소시켰다. 이러한 결과를 확인하기 위해, 본 연구에서는 두가지 암 종류에 해당하는 이종 이식 모델을 연구하였다. 첫번째로, 유방암 모델에서 ODZ10117의 억제 효과는 종양형성을 억제하였으며, 마우스의 생존율을 높이고 폐 전이를 감소시키는 것을 확인하였다. 다음으로, ODZ10117의 투여는 신경 교종 줄기세포의 마우스 이종 이식 모델에서도 종양형성을 저해하고 생존율을 높이는 등 치료 효과를 보였다. 결론적으로, 새롭게 발굴한STAT3의 소분자 억제 화합물인 ODZ10117은 종양에서 STAT3의 활성화 억제를 통해 항암치료에 대한 새로운 치료 전략이 될 수 있음을 시사한다. 나아가, 종양 미세 환경에서 STAT3의 역할과 종양 미세 환경에서의 ODZ10117의 새로운 역할을 규명함으로써, 암세포 뿐만 아니라, 종양 미세 환경에서도 STAT3 저해제의 항암작용 역할을 기대할 수 있다.Introduction 1 Materials and methods 8 Results 20 Figures 34 Discussion 74 References 79 Abstract in Korean 86Docto

A Study on Exclusion and Integration of Aged Women's Labor Power

The purpose of this study is to reveal that aged women(over sixty) are excluded from the labor market and senior employment policy in spite of the fact that they are a capable source of labor. Upon entering aged society, Korea is making various efforts to reinsert aged men into the labor market, as there has been a recent concern regarding a decrease in productive manpower. However, existing studies and policies do not recognize gender discrimination that exists in the labor market and so cannot improve the low social status of aged women or expand their entry into the labor market. Also, the evaluation of the aged women's labor power can also be viewed from the viewpoint of gender discrimination as aged women are suffering from insufficient wages and unstable employment. This study therefore reveals that many discussions regarding current senior employment policy and employment promotion exclude aged women from the labor market and points out that today's senior employment system is centered on aged men. Also, it aims to reveal that aged women are capable of working unlike the existing social recognition and prejudices held, and exposes that the labor power of aged women is underestimated not only in employment policies, but also in the labor market. In order to conduct this study, I have examined references to aged people's employment policies and I conducted interviews with people who work for agency that promote employment of aged people and also a number of aged men and women. The following lists the results from the above study: First, gender discrimination already exists within the policies and discussions involving senior employment. It basically tells us that policies and public discussions regard 'men' as the only labor power, excluding aged women from the labor power. This is clearly shown in regular employment policy, such as the abolition of age limit system or wage peak system. Many aged women who are concentrated in the marginal work market are naturally excluded from the discussions regarding regular employment. As a result, not enough discussions are being conducted with regard to labor conditions and employment expansion for aged women who are categorized in non-regular work fields. Second, exclusion in policies and discussions is leading to exclusion in the labor market. The senior employment centers that directly promote senior employment do not consider aged women's inferior status and exclusion from the labor market seriously. Aged women are recognized as a group of people who lack work experience, labor capacity, and responsibility. The unemployment of aged women is recognized as a personal problem caused by each individual aged woman who is said to have inferior human capital compared to men. However, such recognition or evaluation is based on the gender discriminated ideology that regards men as the primary breadwinner and female as laborers in private sectors or with regard to reproduction. Evaluation on the labor power of the aged women is eventually implemented in gender discrimination. Third, aged women are sufficiently capable of working unlike perceived social notions. Aged women work much in a short period of time through routine working knowledge. The accumulation of working knowledge increases not only their productivity, but also their working speed. Nevertheless, they are constantly being 'driven' out to inferior standings because of the age and gender. Aged women who are being driven out to the marginal labor market suffer from serious unstable employment; such low conditions strengthen their sense of responsibility. The above results from this study reveal that aged women are excluded from the labor market due to gender discrimination and that the labor power of aged women is not being fairly evaluated. The discriminative structure of today's labor market is continuously perpetuated establishing aged women's inferior standings as an untreatable social vice.;본 연구는 여성 노인이 충분히 노동할 수 있는 존재임에도 불구하고 노동 시장 및 노인 고용 정책에서 배제되고 있음을 밝히고자 하였다. 고령화 사회 진입 이후, 한국 사회는 생산인력 감소의 우려에 따라 다시 노인들을 노동 시장 안으로 재투입하려는 노력이 다방면으로 이루어지고 있다. 그러나 기존의 연구 및 정책들은 노동 시장 내 자리 잡은 성차별을 인지하지 못한 채 진행되고 있어 결과적으로 여성 노인들의 열악한 위치를 개선시키거나 이들의 노동 시장 진입을 확대하지 못하는 한계가 있다. 또한 여성 노인들이 가진 노동력에 대한 평가가 성차별적으로 진행되고 있어 여성 노인들이 열악한 임금과 고용 불안에 시달리고 있음을 보지 못하고 있다. 따라서 본 연구에서는 현재 진행되고 있는 노인 고용 정책 및 고용 촉진을 위한 많은 담론들이 여성 노인을 배제하고 있다는 것을 밝혀냄으로써 현재 노인 고용에 관한 흐름들이 남성 노인을 중심으로 이루어지고 있다는 것을 짚어 내고자 했다. 또한 정책 뿐만 아니라 노동 시장 내에서 저평가 되고 있는 여성 노인의 노동력을 드러내 보임으로써 이들이 기존의 사회적 인식 및 편견과 달리 충분히 노동할 수 있는 존재임을 밝히고자 했다. 이를 위한 연구방법으로 고령자 고용 정책 문헌 연구와 함께 적극적 고용 정책의 일환으로 실시되고 있는 고령자취업알선센터 실무진들과 여성 노인 및 남성 노인들을 심층면접 하였다. 연구를 통해 밝혀진 바는 다음과 같다. 첫째, 노인 고용 촉진을 위해 진행되고 있는 정책과 담론들은 성별화 된 방식으로 구성되고 있다. 이와 같은 사실은 정년제 폐지나 임금 피크제와 같은 정규직 중심으로 논의에서 드러난다. 주변화 된 노동 시장 내에 포진되어 있는 많은 여성 노인들은 상용고 중심의 논의에서 자연스럽게 배제되고 있으며 결과적으로 비공식 부문에 분포되어 있는 여성 노인들의 노동 조건 및 직종 확대에 대해서는 논의가 부재한 실정이다. 성차별과 연령차별을 중층적으로 겪고 있는 여성 노인의 주변성은 비가시화 되어 드러나지 않고 있는 것이다. 둘째, 이러한 정책 및 담론에서의 배제는 노동 시장에서의 배제로 이어지고 있다. 노인들의 고용 촉진을 직접적으로 행하고 있는 노인취업센터에서도 여성 노인의 열악한 위치 및 노동시장에서의 배제의 문제를 크게 심각하게 여기지 않고 있다. 여성 노인들을 경력이 없고, 노동 능력이 떨어지며, 책임감이 없는 집단으로 인식하고 있으면서, 일자리 없음의 문제가 결국 인적자본이 남성보다 떨어지는 여성 노인 개인의 탓이라고 인식하고 있는 것이다. 그러나 이러한 판단 및 평가는 남성을 1차적으로 생계부양자로 여기고 여성을 사적 영역 및 재생산 노동을 담당하는 존재로 여기는 성차별적인 이데올로기에 근거한다. 궁극적으로 여성 노인 노동력에 대한 평가는 성별적인 방식으로 구성되어 인지되고 있다. 셋째, 여성 노인들은 사회적 인식과 달리 충분히 노동할 수 있는 능력을 갖추고 있다. 여성 노인들을 노동경험을 통해 쌓여진 작업지식을 통해 적은 시간 내에 많은 노동량을 수행하고 있었다. 축적된 작업 지식은 이들의 생산성을 높일 뿐만 아니라 일 처리 속도 또한 증가시키고 있었다. 그럼에도 불구하고 이들은 연령차별과 성차별의 중층적인 작용으로 계속적으로 열악한 곳으로 ‘내몰림’을 받고 있다. 주변화 된 노동 시장으로 밀려나는 여성 노인들은 심각한 고용불안에 시달리고 있었으며, 이와 같은 조건은 이들의 책임감을 더욱 강화시키는 기제로 작동되고 있다. 이와 같은 연구결과는 여성 노인의 배제가 성별화 된 방식으로 진행되고 있으며, 여성 노인의 노동력에 대한 정당한 평가가 이루어지고 있지 않다는 것을 보여준다. 때문에 현재 노동 시장 내에 자리 잡고 있는 차별의 구조는 계속적으로 재생산 되고 있으며 여성 노인의 열악한 위치는 전혀 개선되지 못하고 있는 실정이다. 따라서 본 연구는 다음과 같은 제언을 한다. 첫째, 현재 빈곤의 위험에 가장 많이 노출되어 있는 여성 노인의 경제적 문제를 해결하기 위해서는 성인지적 노인 고용 정책이 제공되어야 할 것이다. 둘째, 노인 고용 정책을 실질적으로 수행하고 있는 고령자취업알선센터 기관들에서 여성 노인을 위한 재취업 프로그램 및 직종 확대를 위한 적극적인 개입이 요구된다. 셋째, 고령자취업알선센터 뿐만 아니라 여성인력개발센터와 여성회관과 같은 여성들을 대상으로 운영되는 기관들을 적극적으로 활용할 필요가 있다. 넷째, 현재 여성주의 안에서 일어나고 있는 비정규직 차별 철폐와 같은 논의에 여성 노인의 노동권이 포함되어야 할 것이다. 다섯째, 여성 노인들의 생애 주기별 노동 역사에 대한 보다 적극적인 연구가 필요하다.목차 논문개요 = ⅳ Ⅰ. 서론 = 1 A. 문제 제기 및 연구 목적 = 1 B. 선행연구 검토 = 5 C. 연구 대상 및 연구 방법 = 9 1. 연구 참여자 = 9 2. 연구 과정 및 연구 방법 = 13 Ⅱ. 노인 고용 정책 및 담론에서 여성 노인의 배제 = 16 A. 고령화 사회와 여성 노인의 빈곤 = 16 B. 실질적인 ‘생계부양자’로서의 여성 노인 = 20 1. 경제적 필요성 = 20 2. 비공식 통로를 이용한 ‘스스로 일 찾기’ = 24 C. 고령자 고용 촉진을 위한 정책 및 담론의 성별성과 여성노인 배제 = 26 1. 정년제 연장 및 폐지 담론 속에서 비가시화 된 여성 노인의 위치 = 27 2. ‘노인 고용 정책’의 몰성적(gender blind) 성격 = 31 D. 남성 중심적인 과거 노동 경력 논의 = 35 Ⅲ. 성차별과 연령차별이 복합적으로 작동되는 노동 시장 = 39 A. 성별화 된 노동 시장 = 39 1. 경제활동 참가율에서 드러난 여성 노인의 ‘주변성’ = 39 2. 남성 ‘생계부양자’ 이데올로기 = 44 3. 노인 노동 시장의 성별직종 분리 = 46 B. 연령차별 속에 묻혀진 성차별 = 50 1. 동일하게 인식되는 노인의 문제 = 50 2. 연령차별과 성차별의 사각지대에 놓여있는 여성노인 = 53 C. 연령차별과 성차별의 결과: 여성노인 노동력의 저평가 = 56 1. 평가의 방식: 성별화 된 노동력 평가 = 56 2. 체력의 경합: 남성은 강하고 여성은 약하다? = 60 Ⅳ. 비가시화(invisible) 된 여성 노인의 노동능력 드러내기 = 63 A. 주변화 된 노동시장으로 밀려나는 여성 노인 = 63 1. 비가시화 된 육체노동의 수행자 = 63 2. 연령제한에 따른 노동시장 퇴장 압력 = 70 3. 노동에 대한 욕구 = 73 B. 여성 노인의 노동능력: 기존의 노동력 평가 기준으로는 보이지 않는 노동능력 = 75 1. 노동능력: 누구의 시선으로 바라봐야 하는가? = 76 2. 생애사적으로 본 여성 노인의 노동경력 = 78 3. 평가절하 된 여성 노인의 ‘몸’: 비가시화 된 ‘육체노동’ 능력 = 80 4. 생산성을 최대화 하는 기술 = 84 C. 성별 직종 분리 깨트리기 = 96 1. 진입 불가능의 직종 ‘경비직’: 과연 남성만이 할 수 있는가? = 97 2. 성별분업이데올로기에 대한 도전 = 111 Ⅴ. 결론 및 제언 = 116 참고문헌 = 121 ABSTRACT = 13

Analysis of Fusobacterium nucleatum antigens: identification of in vivo-induced antigens and functional analysis of GroEL, a heat shock protein

Objectives Periodontitis is one of the most predominant chronic inflammations of the oral cavity, and has been reported to be associated with systemic diseases. Among the periodontal pathogens, Fusobacterium nucleatum is one of the most predominant bacterium found in periodontitis and plays an important role for subgingival biofilm formation by mediating multiple interactions between early and late colonizers. Accumulating data have demonstrated an association between periodontal pathogens and cardiovascular diseases. And bacterial GroEL, a homologus protein of human heat shock protein 60, is represented as an additional risk factor for atherosclerosis progression. Despite the importance of F. nucleatum in human disease, limited knowledge of F. nucleatum genes expressed in vivo interferes with our understanding of pathogenesis. The purpose of this study is to identify the F. nucleatum genes induced in vivo using in vivo-induced antigen technology (IVIAT) and to investigate whether GroEL of F. nucleatum induces factors that predispose to atherosclerosis in human microvascular endothelial cells (HMEC-1) and apolipoprotein E-deficient (ApoE-/-) mice. Methods To identify specifically expressed F. nucleatum genes during infection, an immune-screening technique termed IVIAT was performed. An IPTG-inducible expression library of F. nucleatum was constructed using pET30 expression vector and F. nucleatum genomic DNA. Total 30,000 recombinant clones of a F. nucleatum genomic DNA expression library were reacted with pooled sera from 10 periodontitis patients pre-adsorbed against in vitro-grown F. nucleatum and Escherichia coli. The reproducibly reactive clones were selected and the inserted DNA sequences in expression vector were analyzed by sequencing to identify the genes. To verify in vivo-induction of genes, the expression of 10 selected genes among the IVIAT-identified genes were analyzed by real time RT-PCR after F. nucleatum was infected into a human epithelial cell line, HOK-16B cells. To investigate the role of F. nucleatum GroEL in the progression of atherosclerosis, recombinant GroEL (rGroEL) of F. nucleatum was produced and tested for its endotoxin decontamination. Invasion assay of F. nucleatum into an endothelial cells, HMEC-1, was performed and then intracellular bacteria were observed and quantified by confocal laser scanning microscopy and flow cytometry, respectively. Anti-F. nucleatum GroEL Ab in serum and F. nucleatum DNA in gingival crevicular fluid were analyzed in periodontitis patients and healthy subjects. rGroEL-treated HMEC-1 cells were analyzed for the expression of interleukin-8 (IL-8), monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1), intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1), E-selectin, tissue factor (TF), and tissue factor pathway inhibitor (TFPI). rGroEL-induced foam cell formation, a hall mark of atherosclerotic lesion, was detected. And the monocyte adhesion to HMEC-1 and transendothelial migration activity were also tested. To explore the effect of F. nucleatum and rGroEL on atherosclerotic lesion progression, 10-week old ApoE-/- mice were fed high fat diet and mice were injected with live F. nucleatum (5 × 107 CFU/mouse), rGroEL (50 μg/mouse), or PBS once a week for 8 weeks. The atherosclerotic lesion in proximal aorta of the mice was detected and the risk markers (C-reactive protein (CRP), low-density lipoprotein (LDL), high-density lipoprotein (HDL), and IL-6) of atherosclerosis were analyzed in serum. And the intracellular signaling pathway of GroEL in HMEC-1 was analyzed using specific inhibitors of MAPK and NF-κB and TLR4 siRNA knockdown system. Results For detection of in vivo-induced genes, 87 clones showed reproducibly the reactivity with pooled sera from 10 periodontitis patients. The clones encoded for 32 different proteins, of which 28 could be assigned to their functions which were categorized in translation, transcription, transport, energy metabolism, cell envelope, cellular process, fatty acid and phospholipid metabolism, transposition, cofactor biosynthesis, amino acid biosynthesis, and DNA replication. The expression of 10 selected in vivo-induced genes were verified to be increased in F. nucleatum after infection into HOK-16B cells, an epithelial cell line. F. nucleatum invaded the HMEC-1 cells and GroEL induced the expression of chemokines such as MCP-1 and IL-8 as well as cell adhesion molecules such as ICAM-1, VCAM-1, and E-selectin. GroEL induced the activity of TF and reduced the activity of the TFPI. Foam cell formation was induced by GroEL. GroEL-injected ApoE-/- mice showed significant atherosclerotic lesion progression compared to control mice. Serum levels of risk factors for atherosclerosis such as IL-6, CRP, and LDL were increased in GroEL-injected ApoE-/- mice compared to control mice, whereas serum levels of HDL were decreased. There were significantly higher levels of anti-F. nucleatum GroEL Ab in serum and F. nucleatum DNA in gingival crevicular fluid in periodontitis patients than those of healthy subjects. The expression levels of GroEL-induced inflammatory mediators were mediated by activation of NF-κB and MAPKs through TLR4 signaling pathway. Conclusion In vivo-induced 32 immunogenic proteins of F. nucleatum could be used to screen antibacterial and anti-inflammatory compounds using a cell infection model. The ability of F. nucleatum GroEL to induce the expression of host factors that were involved in atherosclerosis progression in endothelial cells and ApoE-deficient mice models supports the association of periodontitis and systemic infection.Docto

Modification of host and bacterial protein expression by Orientia tsutsugamushi invasion

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :치의학과 구강악안면 감염-면역학전공,2005.Maste

리포솜 봉입이 약물의 흡수에 미치는 영향

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :약학과 약제학전공,1999.Maste