Soluble IL-2 Receptor: A Biomarker for Assessing Myositis Activity

Objective. To evaluate the clinical significance of serum soluble IL-2R (sIL-2R) in inflammatory myopathies.Methods.Serum sIL-2R and CK levels were determined in 27 patients with IM during periods of disease exacerbation and inactive disease and were compared to 20 healthy controls and 23 controls with noninflammatory elevated CK. The performance of sIL-2R and CK tests for assessing disease activity was compared.Results.sIL-2R levels were increased in patients with IM. Significantly higher sIL-2R levels were detected in patients with disease exacerbation than in patients with inactive disease. In patients with IM, the sIL-2R levels correlated with the CK levels. Based on ROC analysis, diagnostic accuracy of sIL-2R and CK tests for disease activity was similar. However, when the CK threshold was defined by the upper limit of the normal, the specificity for the CK test dropped to 58%.Conclusion.Serum sIL-2R level could be useful to distinguish disease exacerbation from damage in IM, especially in patients with persistent elevated CK levels when a clinical muscular worsening is noted. For discrimination of the disease activity, CK testing requires the use of a different threshold than the upper limit of the normal.</jats:p

Dose-Dependent Immunomodulation of Human Dendritic Cells by the Probiotic Lactobacillus rhamnosus Lcr35

The response of the immune system to probiotics remains controversial. Some strains modulate the cytokine production of dendritic cells (DCs) in vitro and induce a regulatory response, while others induce conversely a pro-inflammatory response. These strain-dependent effects are thought to be linked to specific interactions between bacteria and pattern recognition receptors. We investigated the effects of a well characterized probiotic strain, Lactobacillus rhamnosus Lcr35, on human monocyte-derived immature DCs, using a wide range of bacterial concentrations (multiplicity of infection, MOI, from 0.01 to 100). DNA microarray and qRT-PCR analysis showed that the probiotic induced a large-scale change in gene expression (nearly 1,700 modulated genes, with 3-fold changes), but only with high doses (MOI, 100). The upregulated genes were mainly involved in immune response and identified a molecular signature of inflammation according to the model of Torri. Flow cytometry analysis also revealed a dose-dependent maturation of the DC membrane phenotype, until DCs reached a semi-mature state, with an upregulation of the membrane expression of CD86, CD83, HLA-DR and TLR4, associated with a down-regulation of DC-SIGN, MR and CD14. Measurement of the DC-secreted cytokines showed that Lcr35 induced a strong dose-dependent increase of the pro-Th1/Th17 cytokine levels (TNFα, IL-1β, IL-12p70, IL-12p40 and IL-23), but only a low increase in IL-10 concentration. The probiotic L. rhamnosus Lcr35 therefore induce a dose-dependent immunomodulation of human DCs leading, at high doses, to the semi-maturation of the cells and to a strong pro-inflammatory effect. These results contribute to a fuller understanding of the mechanism of action of this probiotic, and thus of its potential clinical indications in the treatment of either infectious or IgE-dependent allergic diseases

Angioedèmes à kinines (actualités et cas cliniques à Clermont-Ferrand)

L'angioedème à kinines est une maladie rare. C'est un syndrome clinique caractérisé par un gonflement localisé et soudain des tissus sous cutanés ou sous muqueux. Il se définit comme la conséquence clinique d'un phénomène de perméabilité trans-endothéliale. Il est du à un excès de kinines résultant soit d'un déficit en C1 Inh soit d'un déséquilibre entre la kininoformation et le catabolisme des kinines. Il est transitoire et disparaît sans séquelles. Les localisations de l'angioedème à kinines peuvent être multiple cependant il peut être mortel en cas de crise laryngée. C'est pourquoi il est nécessaire de renforcer la connaissance des populations atteintes par cette pathologie. C'est une des missions du Créak. Ce dernier à mis en place un véritable réseau de prise en charge diagnostique et thérapeutique à l'échelle nationale. Ce mémoire regroupe l'ensemble des connaissances sur les différents types d'angioedèmes : la physiopathologie, la traduction biologique et clinique et les traitements ; et les illustre par des cas cliniques du CHU de Clermont-Ferrand.CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocLYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

Analyse de l'incidence des chocs anaphylactiques médicamenteux chez l'adulte (enquête au CHRU de Clermont-Ferrand de 1999 à 2005)

Le choc anaphylactique est la forme la plus sévère de l'anaphylaxie. Il s'installe rapidement suite à l'introduction de l'allergène dans l'organisme et peut mettre en jeu le pronostic vital. L'étude de 67 patients adultes chez lesquels un choc anaphylactique a été suspecté entre 1999 et 2005 au CHRU de Clermont-Ferrand a pour objectif principal l'analyse de ces chocs (étiologie, grades de sévérité) présumés d'origine médicamenteuse ou au latex pour 62. Une consultation d'allergologie est recommandée 6 à 8 semaines après l'accident. Parmi les 67 patients de l'enquête seulement 17 ont été vus à la consultation d'allergologie du CHRU. Seulement 44% des 32 réactions peranesthésiques de l'enquête ont été explorées en consultation d'Allergo-Anesthésie. Ce travail porte également sur l'intérêt diagnostique du dosage de la tryptase évalué selon plusieurs méthodologies d'analyse. Le dernier objectif de cette étude a été de faire l'inventaire des chocs anaphylactiques médicamenteux de l'enquête déclarés au Centre Régional de Pharmacovigilance. Sur l'ensemble des 62 chocs médicamenteux seulement 8 ont été déclarés ce qui représente un taux de déclaration de 13%. Parmi ceux qui ont été explorés lors de la consultation d'allergologie hospitalière seulement 3 ont été déclarés au CRPV.CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocLYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

Le VEGF dans le syndrome POEMS

Le syndrome POEMS est une affection multisystémique rare associée à une dyscrasie plasmocytaire, et caractérisée par la présence d'une polyneuropathie (P), d'une organomégalie (O), d'une endocrinopathie (E), d'une protéine monoclonale (M) et d'anomalies cultanées (S). Sa physiopathogénèse, non encore totalement élucidée, ferait intervenir un excès de production de VEGF (vascular endothelial growth factor), stocké dans les plaquettes de manière linéaire au fur et à mesure de la progression de la maladie. Les taux sériques de VEGF, de sKDR son récepteur soluble et de chaînes légères libres ont été dosés chez 7 patients POEMS suivis au CHU de Clermont Ferrand de 1989 à 2010. Au total, les taux de VEGF sérique seul et rapporté aux plaquettes, ainsi que la quantité de VEGF par plaquettes, étaient élevés chez tous les patients inclus au moment du diagnostic (5/7), et chutaient tousaprès traitement, parallèlement à la rémission clinique. Les taux de sKDR sérique se normalisaient également lorsqu'ils étaient disponibles avant traitement (2/2), ainsi que les taux de chaînes légères libres (2/3), avec une corrélation inverse entre le VEGF et le sKDR maintenue jusqu'en fin de phase évolutive. Le ratio du VEGF sérique sur la numération plaquettaire et la quantité de VEGF relargué par une seule plaquette seraient des marqueurs d'évolutivité clinique dans le syndrome POEMS, reflétant son relarguage local in vivo, responsable d'une activation persistante de la coagulation avec microangiopathies, d'hyperperméabilité vasculaire et de néoangiogénèse, à l'origine des signes systémiques.CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocLYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

Les cryoglobulines (différentes techniques d'identification)

Classées en 3 ou 4 types selon les auteurs, les cryoglobulines peuvent être responsables ou non d'une symptomalogie très variée, de même leurs étiologies sont multiples. De nombreuses évolutions quant aux moyens de recherche et de typage sont apparues au fil des années. un "tour de France" des laboratoires nous a permis de constater l'absence de consensus quant aux techniques d'exploration mises en œuvre. Nous présentons une étude prospective comparant 3 techniques d'identification : le Western blot, l'immunofixation et l'électrophorèse capillaire sur 56 cryoprécipités, obtenus chez 51 patients. Nous avons tenté de faire le lien avec la clinique en consultant les dossiers cliniques de ces patients, nous avons remarqué que la présence ou non de signes cliniques dépend en partie de la concentration de cette cryoglobuline. Nos résultats mettent en évidence une plus grande sensibilité du Western blot, avec un problème parfois de discrimination. Par ailleurs, ces résultats confirment qu'il existe une continuïté finalement entre les types II et III en passant par l'oligoclonalité, profils que nous avons eu du mal à classer, puisque type obtenu différent selon la technique utilisée. L'intérêt de l'immunofixation et de l'électrophorèse de zone est leur plus grande facilité et vitesse d'exécution, et surtout un contrôle de la qualité de lavage, indispensable.CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

Le lupus érythémateux systémique (actualités sur la physiopathologie et les traitements)

Le lupus érythémateux systémique est une maladie auto-immune qui touche près de cinq millions de personnes dans le monde. De nombreux facteurs ont pu être incriminés dans le développement de la maladie. Ils incluent des facteurs génétiques, endocriniens, environnementaux et immunologiques. La compréhension de la physiopathologie du lupus a fortement progressé ces dernières années. De nouvelles thérapies ont pu être ainsi développées, permettant une prise en charge plus adaptée.CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocLYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

Contrôle de qualité des poches de photochimiothérapie extracorporelle par test de transformation lymphoblastique (évaluation du marquage à la thymidine tritiée et mise au point d'une alternative à la CFSE, marqueur fluorescent de prolifération)

Ce travail porte sur le contrôle de qualité des poches de photochimiothérapie extracorporelle (PCE). Dans un 1er temps, nous avons évalué la méthode de référence, un test de transformation lymphoblastique avec marquage à la thymidine tritiée. Ce type de contrôle est réalisé au laboratoire d Immunologie du CHU depuis 2003. Au total, nous avons testé 142 procédures. Dans une 2ème partie, nous avons développé une alternative afin d éviter l usage de produits radioactifs (18 échantillons). Il s agit d un test de prolifération lymphocytaire avec marquage à la CFSE et lecture par cytométrie en flux. Enfin, nous avons comparé les performances des 2 tests. Le test à la thymidine a apporté la preuve de sa validité. Dans la majorité des cas, on obtient des hauts niveaux d incorporation couplés à des pourcentages d inhibition après PCE très élevés. Les résultats sont sans ambiguïté. Les résultats des 2 techniques sont tout à fait concordants dès lors qu une prolifération est obtenue en CFSE. Un pourcentage non négligeable de procédures reste ininterprétable en CFSE, du fait d une absence de réponse proliférative décelable. Ce test ne peut donc pas être recommandé en routine. Néanmoins, il apporte beaucoup d informations (morphologie, division, transformation blastique ). Dans l avenir, nous pourrions coupler ce test avec un marqueur d apoptose type Tunel assay.CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

Interactions cellules dendritiques humaines - bactéries probiotiques et pathogènes, et orientation de la réponse immunitaire muqueuse

Les cellules dendritriques (DCs) jouent un rôle critique dans l'orchestration des réponses immunes adaptatives. Sous une forme immature, elles stationnent dans les muqueuses, où elles surveillent le microenvironnement via des récepteurs, les PRRs. L'activation de la DC par de multiples PAMPs module son profil de différenciation, déterminant dans un 2ème temps la polarisation de la réponse vers les différentes voies effectrices Th1, Th2, Th17 ou vers la génération de T régulateurs. Dans ce travail, nous avons étudié la réponse de cellules dendritiques humaines, dérivées des monocytes, à l'exposition à une bactérie pathogène, Klebsiella pneumoniae LM21, et à une bactérie probiotique, Lactobacillus rhamnosus Lcr35. Pour K. pneumoniae, nous disposions de mutants isogéniques déficients en capsule ou en antigène O du LPS. Nous avons mis en évidence en microscopie confocale que la capsule freinait considérablement la phagocytose des bactéries par les DCs. Parallèlement, en cytométrie en flux, les mutants capsule induisaient une maturation des DCs plus importante que la souche sauvage et une augmentation des cytokines Th1. Nous avons investigué les effets du L. rhamnosus Lcr35 sur la maturation des DCs en utilisant une large gamme de concentrations. Le probiotique à fortes doses induisait un changement à grande échelle de l'expression génique sur les puces à ADN avec une signature moléculaire inflammatoire. En cytométrie, le probiotique induisait une maturation dose-dépendante des DCs, jusqu'à un état semi-mature. Les dosages ELISA ont démontré que le probiotique induisait une augmentation dose-dépendante des cytokines pro-Th1/Th17 (TNFa, IL-12 et IL-23).Dendritic cells (DCs) play a critical role in orchestrating adaptive immune responses. Immature DCs reside in peripheral tissues, such as the mucosa, where they sense the microenvironment via pattern recognition receptors, which recognize pathogen products called pathogen-associated molecular patterns (PAMPs). The activation of DCs by multiple PAMPs modulates their profiles of differentiation, which will determine at a later time the polarization of the response to different effector pathways Th1, Th2, Th17 or to the generation of regulatory T cells. In this work, we studied the response of human dendritics cells, derived from monocytes, to exposure to a pathogenic bacterium, Klebsiella pneumoniae LM21 and a probiotic bacterium, Lactobacillus rhamnosus Lcr35. For K. pneumoniae, we had isogenic mutants deficient in capsule or O-antigen of LPS. We demonstrated by confocal microscopy that the capsule severely constrained the phagocytosis of bacteria by DCs. In parallel, flow cytometry showed that the capsule mutants led to a greater maturation of DCs compared to the wild strain and increased Th1 cytokine production. LPS mutants induced a less marked increase of these cytokines. We investigated the effects of L. rhamnosus Lcr35 on the maturation of DCs using a wide range of concentrations. The probiotic, at high doses, induced large-scale changes in gene expression on DNA microarrays with a molecular signature of inflammatory type. In cytometry, the probiotic induced a dose-dependent maturation of DCs, until a semi-mature state. Cytokine measurement revealed the induction by the probiotic of a dose-dependent increase in the pro-Th1/Th17 cytokines (TNFa, IL-12 and IL-23).CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocSudocFranceF

Incidence des thromboses et évaluation d'anticorps antiphospholipides non usuels chez des patients présentant un "lupus anticoagulant" isolé (sans anticardiolipide, ni anti-B2GP1) (étude rétrospective à propos de 152 patients)

CLERMONT FD-BCIU-Santé (631132104) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF