Nuclear trafficking, histone cleavage and induction of apoptosis by the meningococcal App and MspA autotransporters

Neisseria meningitidis, a major cause of bacterial meningitis and septicaemia, secretes multiple virulence factors, including the adhesion and penetration protein (App) and meningococcal serine protease A (MspA). Both are conserved, immunogenic, type Va autotransporters harbouring S6-family serine endopeptidase domains. Previous work suggested that both could mediate adherence to human cells, but their precise contribution to meningococcal pathogenesis was unclear. Here, we confirm that App and MspA are in vivo virulence factors since human CD46-expressing transgenic mice infected with meningococcal mutants lacking App, MspA or both had improved survival rates compared with mice infected with wild type. Confocal imaging showed that App and MspA were internalized by human cells and trafficked to the nucleus. Cross-linking and enzyme-linked immuno assay (ELISA) confirmed that mannose receptor (MR), transferrin receptor 1 (TfR1) and histones interact with MspA and App. Dendritic cell (DC) uptake could be blocked using mannan and transferrin, the specific physiological ligands for MR and TfR1, whereas in vitro clipping assays confirmed the ability of both proteins to proteolytically cleave the core histone H3. Finally, we show that App and MspA induce a dose-dependent increase in DC death via caspase-dependent apoptosis. Our data provide novel insights into the roles of App and MspA in meningococcal infection

Etude de la localisation cellulaire et du rôle de la protéine YopM de Yersinia enterocolitica

Upon contact with host cells, bacteria from Yersinia genus deliver six virulence proteins, termed Yops, into the host cell cytoplasm via a secretion mechanism called type III secretion. Of these six Yop, YopM is the only one for which neither a target nor an activity has been identified so far. It is neverthless essential for full virulence of Yersinia in mice. YopM is a very acidic protein that belongs to the leucine-rich repeat (LRR) structural family of proteins. Unlike the other Yops, which are highly conserved among the human-pathogenic yersiniae, YopM shows considerable heterogeneity in the number of LRRs. YopM was recently shown to accumulate in the nuclei of target eukaryotic cells by a mechanism that requires vesicular trafficking. YopM does not contain a sequence ressembling a known nuclear localization signal (NLS) for the regulated entry via nuclear pores. Using a yeast approach, we observed that the 32 C-terminal residues of YopM (C-ter) act as a NLS (publication1). This C-ter does not resemble any classical NLS. The C-ter was shown to direct large recombinant proteins into the nucleus of mammalian cells. The property of this domain was retained in yeast mutants affected in seven different known karyopherins. Thus we conclude that YopM reaches the nucleus by a mechanism independent of any known karyopherin (publication1). An analysis of the transcriptome of infected macrophages has shown that YopM influences the transcription of macrophage genes including B-myb. Here, we confirmed that YopM down-regulates the expression of B-myb in cells that were transfected with yopM or infected with Y.enterocolitica injecting YopM (unpublished results). We therefore conclude that migration to the nucleus is a pre-requisite for the inhibition of transcription of B-myb. The most likely hypothesis to explain the action of YopM is that YopM interacts with a transcriptional regulator. A two-hybrid screen conducted to identify an hypothetical partner turned out to be not conclusive because of a very high number of hits, attributable to the LRRs (unpublished results) . As an annex to this thesis, the role of YopP in apoptosis is presented (publication 2).YopM est l'une des six protéines Yop effectrices injectées dans le cytosol de la cellule cible par le système de sécrétion de type III des Yersinias pathogènes. Parmi les autres protéines Yop, YopM est le seul effecteur dont la cible et l'activité enzymatique ne sont pas encore connues. YopM est un facteur important pour la virulence des Yersinia. C'est une protéine acide qui fait partie d'une grande famille de protéines à motifs LRRs (leucine-rich repeat). À la différence des autres protéines Yops qui sont conservées dans toutes les espèces de Yersinia, YopM présente une certaine hétérogénéité portant essentiellement sur le nombre des LRRs. Des études récentes ont montré que la migration de YopM dans le noyau requiert le trafic vésiculaire de la cellule cible. YopM ne contient pas de séquence ressemblant aux autres séquences de localisation nucléaires (NLS) connues lui permettant de franchir le pore nucléaire. En utilisant un système dimportation nucléaire dans la levure, nous avons observé que les 32 résidus constituant la partie C-terminale de YopM pourrait fonctionner comme une séquence NLS (publication1). Le signal contenu dans cette partie C-terminale ne ressemble à aucune NLS connue. La partie C-ter de YopM garde sa capacité à migrer vers le noyau dans les mutants de levures affectés dans les 7 transporteurs karyopherines connus (publication1). Nous concluons que la migration de YopM se fait d'une manière indépendante des voies de transport nucléaire classiques. L'analyse du transcriptome de macrophages infectés avec Yersinia, a montré que YopM influence la transcription de plusieurs gènes incluant le facteur transcriptionnel B-myb. Nous avons confirmé que YopM réprime l'expression de B-myb dans les cellules HEK293 transfectées avec yopM ou infectées avec une Yersinia surproduisant YopM (résultats non publiés). Nous concluons que la migration de YopM dans le noyau est requise pour l'inhibition de la transcription de B-myb. Une hypothèse plausible pour expliquer l'effet de YopM au niveau du noyau est qu'il interagit avec un régulateur transcriptionnel. Nous avons criblé une banque de cellules HeLa afin d'identifier la cible de YopM sans pouvoir l'obtenir vu le nombre important d'ADNc différents obtenus et vu qu'il était difficile d'attribuer un rôle physiologique à toutes ces interactions (résultats non publiés). Comme annexe à cette thèse, le rôle de YopP dans l'apoptose est présentée (publication2).Thèse de doctorat en sciences biomédicales (microbiologie moléculaire et cellulaire) (SBIM 3)--UCL, 200

Nanotechnologies en santé (applications actuelles, aspects toxicologiques et marché)

MONTPELLIER-BU Pharmacie (341722105) / SudocSudocFranceF

Smart packaging market evolution in the industrialized countries : today's and future trends

D’un simple outil de protection des aliments et de transport des objets, l’emballage est devenu une science qui évolue sans répit. Depuis peu, l’emballage franchit une nouvelle étape, d’un outil de vente, il devient un acteur qui prolonge la durée de conservation des aliments et les préserve, ainsi qu'un langage censé parler au producteur, au distributeur et même au consommateur. En contradiction avec la plupart des législations qui définissaient l’emballage comme inerte, les nouveaux emballages sont des éléments actifs ou intelligents. Cependant, ce qu’en Europe et aux Etats-Unis on considère être de nouvelles technologies d’emballage, existe au Japon depuis plusieurs décennies déjà. Tout l’enjeu est donc de comprendre pourquoi et comment, sur un marché mondialisé où la course vers l’innovation et les nouvelles technologies est permanente, le Smart Packaging arrive en Europe avec quarante ans de retard. Cette étude a pour objectif de donner un aperçu sur les technologies, les applications existantes et les enjeux du Smart Packaging, ainsi que sur les perspectives des innovations. Il est par ailleurs essentiel d'analyser la pérennité et la viabilité des nouvelles technologies de l’emballage dans le secteur agroalimentaire des pays industrialisés, en apportant un éclairage sur l’actualité du marché ainsi que sur sa dynamique et sur les tendances majeures de son évolution à court et à long termes. Le projet a de même pour but de développer les stratégies de marketing, d’export et de gestion des risques à appliquer à un marché international, et de définir les cadres réglementaires des principaux pays industrialisés et les risques pour l’environnement et le consommateur.Packaging used to be a very common, unnoticed, everyday life object for food protection and transportation. It is now a whole scientific subject that evolves on a daily basis. Recently packaging has crossed a new threshold: it is no more a simple marketing tool. Today packaging acts as a food protector that prolongs the shelf life and provides information to manufacturers, distributors, and even consumers. In complete contradiction with all the legislation that defined it as an inert object, new packaging technologies are active and intelligent devices. However, what is called in Europe and the United States a new technology, has been marketed in Japan for decades. The challenge is to understand how and why Smart Packaging was so late to enter Europe and the US at a time when globalization in trade and communication are stronger than ever, and the race for innovation and new technologies is permanent. The main objective of this report is to give insights into today’s market stakes, its opportunities, major trends and short and long term evolution, as well as its growth potential and the major factors that influence it on one hand. On the other hand it provides analysis for the future and the viability of the new technologies in food and drink sectors on developed countries markets. To achieve these purposes, it is essential to give an overview of the existing technologies and applications and explain the stakes of using Smart Packaging, as well as innovation perspectives. Moreover, this projects highlights how the companies meet the challenge of developing marketing, exportation and risk strategies on a global market, whithin the boundaries of the regulatory frameworks and risks for the environment and the consumer

Novel Degradable Polymers Combining d-Gluconic Acid, a Sugar of Vegetal Origin, with Lactic and Glycolic Acids

To synthesize functionalized poly(lactic acid-co-glycolic acid)-based polyesters for biomedical and pharmaceutical applications such as controlled drug delivery, d-gluconic acid was considered as an interesting source of comonomer. Accordingly d-gluconic acid was used to synthesize novel 1,4-dioxane-2,5-diones with protected hydroxyl groups, namely 3-(1,2:3,4-tetraoxobutyl-di-O-isopropylidene)-dioxane-2,5-dione (5a) and 3-methyl-6-(1,2:3,4-tetraoxobutyl-di-O-isopropylidene)-dioxane-2,5-dione (5b). The ring-opening homopolymerization and copolymerization of these cyclic dilactones with dl-lactide provided novel degradable polyesters with higher glass transition temperatures than poly(lactic acid-co-glycolic acid) polymers