Interaction of group-specific component (vitamin D-binding protein) with immobilized Cibacron blue F3-GA

Group-specific component (vitamin D-binding protein) was purified to homogeneity from human plasma by a three-step procedure involving pseudo-ligand affinity chromatography on immobilized Cibacron blue F3-GA followed by gel filtration and ion-exchange chromatography. Upon pseudo-ligand chromatography, Gc globulin was separated into two peaks. The first, which represented approx. 4% of the total Gc globulin, was eluted together with other alpha-globulins of similar Mr and/or pI, and the second (96% of Gc globulin) was clearly retarded. Collection of the latter provided a fraction 10-fold enriched in Gc globulin, with yields higher than 90%. Incubation of plasma with trace amounts of radioactively-labeled 25-OH vitamin D3 showed that the radioactivity coeluted with the first peak. In addition, after saturation with 25-OH vitamin D3, all the Gc globulin was eluted in the first peak. This indicates that the two peaks correspond to the holo and the apo forms of the protein, respectively, and suggests that either the interaction of the apo form with the Cibacron blue dye involves the binding site for vitamin D metabolites, or that the holo-protein undergoes a conformational change as a consequence of formation of the complex

Validation of a method for measuring the antielastolytic activity of human circulating alpha1-antitrypsin

International audienceL’existence de variants d’alpha-1 antitrypsine à phénotype et concentration sérique apparemment sans particularités contrastant avec un tableau clinique évocateur de l’existence d’un déficit sévère nous a conduits à rechercher dans ces cas de figure une diminution voire une suppression de la capacité de l’alpha-1 antitrypsine à inhiber l’élastase. Pour ce faire et dans deux laboratoires différents, nous avons adapté et validé une méthode de mesure de l’activité fonctionnelle de l’alpha-1 antitrypsine dont le principe repose sur l’analyse spectrophotométrique cinétique de l’inhibition par l’alpha-1 antitrypsine sérique de l’activité hydrolytique de l’élastase pancréatique de porc sur un substrat chromogène.Cette méthode s’est avérée robuste, reproductible et transférable et a permis de définir à partir de l’analyse d’une population hospitalière, un index de fonctionnalité dont l’intervalle de confiance à 95 % compris entre 0,87 et 1,2 permet d’identifier les sujets susceptibles de présenter un déficit fonctionnel de l’alpha-1 antitrypsine, que ce déficit soit d’origine génétique mais sans traduction quantitative et phénotypique ou bien que ce déficit soit acquis sous l’effet d’agents extérieurs (fumée de cigarettes ou virus)