Contribution of S6K1/MAPK signaling pathways in the response to oxidative stress: activation of RSK and MSK by hydrogen peroxide

Trobareu correccions de l'article a: http://dx.doi.org/10.1371/annotation/0b485bd9-b1b2-4c60-ab22-3ac5d271dc59Cells respond to different kind of stress through the coordinated activation of signaling pathways such as MAPK or p53. To find which molecular mechanisms are involved, we need to understand their cell adaptation. The ribosomal protein, S6 kinase 1 (S6K1), is a common downstream target of signaling by hormonal or nutritional stress. Here, we investigated the initial contribution of S6K1/MAPK signaling pathways in the cell response to oxidative stress produced by hydrogen peroxide (H2O2). To analyze S6K1 activation, we used the commercial anti-phospho-Thr389-S6K1 antibody most frequently mentioned in the bibliography. We found that this antibody detected an 80-90 kDa protein that was rapidly phosphorylated in response to H2O2 in several human cells. Unexpectedly, this phosphorylation was insensitive to both mTOR and PI3K inhibitors, and knock-down experiments showed that this protein was not S6K1. RSK and MSK proteins were candidate targets of this phosphorylation. We demonstrated that H2O2 stimulated phosphorylation of RSK and MSK kinases at residues that are homologous to Thr389 in S6K1. This phosphorylation required the activity of either p38 or ERK MAP kinases. Kinase assays showed activation of RSK and MSK by H2O2. Experiments with mouse embryonic fibroblasts from p38 animals" knockout confirmed these observations. Altogether, these findings show that the S6K1 signaling pathway is not activated under these conditions, clarify previous observations probably misinterpreted by non-specific detection of proteins RSK and MSK by the anti-phospho-Thr389-S6K1 antibody, and demonstrate the specific activation of MAPK signaling pathways through ERK/p38/RSK/MSK by H2O2

Safety of long-term denosumab therapy: results from the open label extension phase of two phase 3 studies in patients with metastatic breast and prostate cancer

Purpose: Zoledronic acid (ZA) or denosumab treatment reduces skeletal-related events; however, the safety of prolonged therapy has not been adequately studied. Here, we describe safety results of extended denosumab therapy in patients with bone metastases from the open-label extension phase of two phase 3 trials. Methods: Patients with metastatic breast or prostate cancer received subcutaneous denosumab 120 mg Q4W or intravenous ZA 4 mg Q4W in a double-blinded fashion. Denosumab demonstrated superior efficacy in the blinded treatment phase; thus, patients were offered open-label denosumab for up to an additional 2 years. Results: Cumulative median (Q1, Q3) denosumab exposure was 19.1 (9.2, 32.2) months in the breast cancer trial (n = 1019) and 12.0 (5.6, 21.3) months in the prostate cancer trial (n = 942); 295 patients received denosumab for >3 years. No new safety signals were identified during the open-label phase, or among patients who switched from ZA to denosumab. During the blinded treatment phase, exposure-adjusted subject incidences of osteonecrosis of the jaw (ONJ) were 49 (1.9 %) and 31 (1.2 %) in the denosumab and ZA groups, respectively. In total, 32 (6.9 %) and 25 (5.5 %) new cases of ONJ (not adjusted for exposure) were reported for patients continuing and switching to denosumab, respectively. The incidences of hypocalcemia were 4.3 and 3.1 %, in patients continuing and switching to denosumab, respectively. Conclusion: These results describe the safety profile of denosumab after long-term exposure, or after switching to denosumab from ZA. No new safety signals were identified. Hypocalcemia rates were similar in the blinded treatment and open-label phases. ONJ rates increased with increasing exposure to antiresorptives, consistent with previous reports

IMPLANTAÇÃO DE AVIÁRIO DE GALINHAS POEDEIRAS-OVOS CAIPIRAS

O presente trabalho foi possibilitado através da parceria entre a APP (associação de pais e professores) do Instituto Federal Catarinense - campus Rio do Sul e o Instituto Souza Cruz. Desta parceria o projeto de ensino e extensão, intitulado Novos Rurais IFC/Souza Cruz - Fixação de Jovens no Meio Rural, foi possibilitado. O trabalho contou com uma primeira etapa de formação em empreendedorismo seguido pela implantação dos projetos empreendedores através de subsídios financeiros doados pelo Instituto Souza Cruz. O projeto teve como objetivo despertar e aprimorar o empreendedorismo, a inovação, a diversificação e gestão rural ao identificar e respeitar o histórico da propriedade rural com a finalidade de aumentar e diversificar a renda ao implantar ou aprimorar produtos e processos. Dessa forma, após a formação em empreendedorismo, identificamos a viabilidade de implantar um aviário de galinhas poedeiras para diversificação de produção na propriedade e atrativo para o Agro turismo. As raças de aves que serão utilizadas serão Hysex Brown, Isa Brown, New Hampshire, Embrapa 051 e Sussex. O objetivo do projeto é a produção de ovos coloniais, para venda direta ao consumidor, feiras e Mercado público. Para este projeto está sendo utilizado uma área que servia para o cultivo de hortaliças, mas que está próxima a pastagem que será utilizada para os piquetes onde as galinhas terão acesso. Com esta implantação, será possível logo aumentar a diversidade de produção na propriedade e gerar mais uma renda, em resposta a uma procura de produtos já a presentada através de parceiros que querem colaborar com a venda. A programação principal para a venda está destinada para o Mercado público, que apresenta   uma demanda pelo produto e falta de produtores. Em adição a essa fonte de renda, o aviário e os ovos coloniais também estarão presentes as atividades de Agro turismo da propriedade,  os ovos podem ser utilizados na realização dos cafés, tanto para venda, como também ingrediente para várias receitas, tanto nos almoços como nos cafés coloniais que a propriedade serve. Outro produto desse projeto são as galinhas caipiras, após o período ideal de postura, o abate desses animais será realizado e o consumo da carne será servido nos almoços, visto que muitos querem uma galinha caipira com aipim e arroz. Muitos também pedem a famosa chimia de ovos, que é doce, e ficará muito mais saborosa com o ingrediente principal produzido na própria propriedade. Como resultados, pretendemos mostrar ao visitantes que além de gerar renda, a propriedade valoriza o bem-estar dos animais e a sua adaptação à natureza, sem degradá-la e ainda no foco da produção de ovos caipira visando a certificação orgânica. O projeto está em fase de conclusão para implantação e recebimento das aves.  Agradecemos o apoio financeiro do Projeto Novos Rurais concedido através do Instituto Souza Cruz

PRODUÇÃO DE BACORINHOS PARA VENDA NA COMUNIDADE LOCAL

O presente trabalho foi possibilitado através da parceria entre a APP (associação de pais e professores) do Instituto Federal Catarinense - campus Rio do Sul e o Instituto Souza Cruz. Desta parceria o projeto de ensino e extensão, intitulado Novos Rurais IFC/Souza Cruz - Fixação de Jovens no Meio Rural, foi possibilitado. O trabalho contou com uma primeira etapa de formação em empreendedorismo, seguido pela implantação dos projetos empreendedores através de subsídios financeiros doados pelo Instituto Souza Cruz. O projeto teve como objetivo despertar e aprimorar o empreendedorismo, a inovação, a diversificação e gestão rural ao identificar e respeitar o histórico da propriedade rural com a finalidade de aumentar e diversificar a renda ao implantar ou aprimorar produtos e processos. Dessa forma, após a formação em empreendedorismo, identificamos a viabilidade de implantar uma granja para a produção de bacorinhos, tendo em vista que a comunidade local era carente deste produto e precisavam deslocar-se grandes distâncias para adquirir os animais. O projeto começou a ser executado em outubro de 2019, sendo que houve necessidade de modificação de parte do projeto durante a execução da obra, pois estava previsto a construção de uma estrutura de 50m² e foi construída uma granja de 90m². A estrutura comporta um total de 14 matrizes e 1 reprodutor, tendo uma produção anual de aproximadamente 280 bacorinhos, que são comercializados pelo valor de R$250,00 cada. Devido à produção própria da maior parte da alimentação dos suínos, no caso o milho, conseguimos ter um bom custo de produção, com um consumo médio anual de 20.000 quilos de ração e um custo de produção de aproximadamente R$ 25.000,00 anuais, o que resulta em uma receita de aproximadamente R$70.000,00 reais anuais. O projeto foi implementado em sociedade familiar, eu recebo anualmente 10$ 4.500,00 por ano. O projeto foi de extrema importância para mim e minha família, tendo realizado o objetivo inicial, que era diversificar a renda da propriedade, além de ter sido minha primeira experiência com o empreendedorismo, sendo este meu primeiro negócio, e que me proporcionou base para continuar a empreender.

CRIAÇÃO DE GALINHA CAIPIRA E PERU A PARTIR DE CHOCADEIRA ELÉTRICA

O ramo da avicultura representa um dos grandes pilares da economia brasileira, movimentando capital e gerando empregos. Além disso, o Brasil é um dos maiores produtores e exportadores mundiais de aves e ovos. Nesse sentido, o presente trabalho teve por objetivo criar galinhas caipiras e peru por meio de uma chocadeira elétrica e a posterior venda das aves em sua fase inicial de desenvolvimento. A metodologia consistiu basicamente na aquisição da chocadeira elétrica e ovos galados de produtores locais para a criação, bem como também a adequação do espaço para comportar a chocadeira e os pintinhos recém-eclodidos. O projeto iniciou-se em dezembro de 2020 na localidade da Serra Canoas no município de Rio do Sul, com a primeira incubação realizada em janeiro de 2021. Foram incubados cerca de 100 ovos na primeira incubação, com diversas raças de galinhas, sendo: Carijó, Brahma Buff, Índio Gigante e outras. Além disso, também foram incubados ovos de Peru. A incubação leva cerca de 21 dias, sendo que com 9 dias, já é possível visualizar o embrião formando-se através da técnica de ovoscopia. Com a evolução do projeto, não só aves convencionais, mas também aves ornamentais foram criadas, como a galinha Cara de Palhaço. Um dos pontos negativos que um produtor avícola enfrenta na produção de aves a partir de chocadeira elétrica, é a dependência de energia elétrica. Em um dado momento, com a queda de energia, metade dos ovos incubados foram perdidos. A chocadeira é configurada a uma temperatura constante em torno de 38ºC e com umidade relativa de 60%, mas com a queda da temperatura da chocadeira em virtude da falta de energia, o embrião morre. A venda em geral das aves em sua fase inicial, não se mostrou muito dificultoso, visto que as redes sociais têm papel fundamental para o marketing atualmente. Por fim, o projeto realizado evidenciou a importância do empreendedorismo agrícola e o estímulo de novos produtores avícolas, visto que a área é de fácil manejo e pode trazer bons lucros. Agradecemos o suporte financeiro do programa Novos Rurais da Instituição Souza Cruz

Variability of the conserved V3 loop tip motif in HIV-1 subtype B isolates collected from Brazilian and French patients

The diversity of the V3 loop tip motif sequences of HIV-1 subtype B was analyzed in patients from Botucatu (Brazil) and Montpellier (France). Overall, 37 tetrameric tip motifs were identified, 28 and 17 of them being recognized in Brazilian and French patients, respectively. The GPGR (P) motif was predominant in French but not in Brazilian patients (53.5% vs 31.0%), whereas the GWGR (W) motif was frequent in Brazilian patients (23.0%) and absent in French patients. Three tip motif groups were considered: P, W, and non-P non-W groups. The distribution of HIV-1 isolates into the three groups was significantly different between isolates from Botucatu and from Montpellier (P < 0.001). A higher proportion of CXCR4-using HIV-1 (X4 variants) was observed in the non-P non-W group as compared with the P group (37.5% vs 19.1%), and no X4 variant was identified in the W group (P < 0.001). The higher proportion of X4 variants in the non-P non-W group was essentially observed among the patients from Montpellier, who have been infected with HIV-1 for a longer period of time than those from Botucatu. Among patients from Montpellier, CD4+ cell counts were lower in patients belonging to the non-P non-W group than in those belonging to the P group (24 cells/μL vs 197 cells/μL; P = 0.005). Taken together, the results suggest that variability of the V3 loop tip motif may be related to HIV-1 coreceptor usage and to disease progression. However, as analyzed by a bioinformatic method, the substitution of the V3 loop tip motif of the subtype B consensus sequence with the different tip motifs identified in the present study was not sufficient to induce a change in HIV-1 coreceptor usage

Squalamine and Its Derivatives Modulate the Aggregation of Amyloid-β and α-Synuclein and Suppress the Toxicity of Their Oligomers.

The aberrant aggregation of proteins is a key molecular event in the development and progression of a wide range of neurodegenerative disorders. We have shown previously that squalamine and trodusquemine, two natural products in the aminosterol class, can modulate the aggregation of the amyloid-β peptide (Aβ) and of α-synuclein (αS), which are associated with Alzheimer's and Parkinson's diseases. In this work, we expand our previous analyses to two squalamine derivatives, des-squalamine and α-squalamine, obtaining further insights into the mechanism by which aminosterols modulate Aβ and αS aggregation. We then characterize the ability of these small molecules to alter the physicochemical properties of stabilized oligomeric species in vitro and to suppress the toxicity of these aggregates to varying degrees toward human neuroblastoma cells. We found that, despite the fact that these aminosterols exert opposing effects on Aβ and αS aggregation under the conditions that we tested, the modifications that they induced to the toxicity of oligomers were similar. Our results indicate that the suppression of toxicity is mediated by the displacement of toxic oligomeric species from cellular membranes by the aminosterols. This study, thus, provides evidence that aminosterols could be rationally optimized in drug discovery programs to target oligomer toxicity in Alzheimer's and Parkinson's diseases

Gastrin-Releasing Peptide Receptor Antagonism Induces Protection from Lethal Sepsis: Involvement of Toll-like Receptor 4 Signaling

In sepsis, toll-like receptor (TLR)-4 modulates the migration of neutrophils to infectious foci, favoring bacteremia and mortality. In experimental sepsis, organ dysfunction and cytokines released by activated macrophages can be reduced by gastrin-releasing peptide (GRP) receptor (GRPR) antagonist RC-3095. Here we report a link between GRPR and TLR-4 in experimental models and in sepsis patients. RAW 264.7 culture cells were exposed to lipopolysaccharide (LPS) or tumor necrosis factor (TNF)-alpha and RC-3095 (10 ng/mL), Male Wistar rats were subjected to cecal ligation and puncture (CLP), and RC-3095 was administered (3 mg/kg, subcutaneously); after 6 h, we removed the blood, bronchoalveolar lavage, peritoneal lavage and lung. Human patients with a clinical diagnosis of sepsis received a continuous infusion with RC-3095 (3 mg/kg, intravenous) over a period of 12 h, and plasma was collected before and after RC-3095 administration and, in a different set of patients with systemic inflammatory response syndrome (SIRS) or sepsis. GRP plasma levels were determined. RC-3095 inhibited TLR-4, extracellular-signal-related kinase (ERK)-1/2, Jun NH2-terminal kinase (JNK) and Akt and decreased activation of activator protein 1 (AP-1), nuclear factor (NF)-kappa B and interleukin (IL)-6 in macrophages stimulated by LPS. It also decreased IL-6 release from macrophages stimulated by TNF-alpha. RC-3095 treatment in CLP rats decreased lung TLR-4, reduced the migration of cells to the lung and reduced systemic cytokines and bacterial dissemination. Patients with sepsis and systemic inflammatory response syndrome have elevated plasma levels of GRP which associates with clinical outcome in the sepsis patients. These findings highlight the role of GRPR signaling in sepsis outcome and the beneficial action of GRPR antagonists in controlling the inflammatory response in sepsis through a mechanism involving at least inhibition of TLR-4 signaling. Online address: http://www.molmed.org doi: 10.2119/molmed.2012.0008