HIV-1 BF intersubtype recombinant Vpu second alpha helix plays an important role in the viral release and BST-2 degradation

We previously reported a naturally occurring BF intersubtype recombinant Vpu variant with augmented capacity to enhance viral replication. Structural analysis of this variant revealed that its transmembrane domain (TMD) and α-helix I in the cytoplasmic domain (CTD) corresponded to subtype B, whereas CTD α-helix II corresponded to subtype F1. This work was aimed at evaluating the role of Vpu CTD α-helix II domain on viral release enhancement and down-modulation of BST-2 and CD4 from cell surface. In addition, as serine residues in either Vpu amino acid positions 61 or 64 have been shown to regulate Vpu intracellular half-life, which in turn could influence the magnitude of viral release, we also studied the impact of these residues in the BF Vpu functions, since S61 and S64 are infrequently found among BF recombinant Vpu variants. Our results showed that interchange of Vpu α-helix II between subtypes (B→F) directly correlated with enhancement of viral release and, to a lesser extent, with changes in the capacity to down-modulate BST-2 and CD4 of the resulting chimera. No statistical differences on viral release and BST-2 down-modulation were observed between Vpu BF and VpuBF E61S. On the other hand, VpuBF A64S showed a slightly reduced capacity to enhance viral production but was modestly more efficient than VpuBF in down-modulating BST-2. In summary, our observations clearly evidence that α-helix II is actively involved in Vpu viral release-promoting activity, and that intersubtype recombination between subtypes B and F1 originated a protein variant with higher potential to boost the spread of the recombinant strain that harbors it.Fil: de Candia, Cristian Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina;Fil: Espada, Constanza Eleonora. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiologia. Centro Nacional de Referencia del Sida; Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina;Fil: Duette, Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina; Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología; Argentina;Fil: Salomon, Horacio Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina; Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología; Argentina;Fil: Carobene, Mauricio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiologia. Centro Nacional de Referencia del Sida; Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina

Variabilidad genómica del virus de la Inmunodeficiencia Humana tipo I en individuos con conductas de alto riesgo y su impacto sobre la capacidad replicativa viral in vitro

The genetic characterization of the Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1)\nepidemic in Argentina showed that subtype B is the most prevalent in men who have\nsex with men while BF recombinant forms are most prevalent among heterosexuals\nand intravenous drug users. Thus, patients with multiple epidemiological risks may be\nexposed to both. The gag/pol genomic region plays a fundamental role during the viral\nlife cycle and it has been shown that recombination is a common feature in this region,\nwhich may affect the viral replication capacity (RC) of the recombinant virus. Herein we\nanalyzed the presence of HIV dual infections in individuals with high probability of reinfection\nand we evaluated the impact of intersubtype recombination in the gag/pol\nregion on viral RC and relative RC.\nThree dual infections were detected, two corresponded to individuals co-infected with\nsubtype B and BF recombinant variants, and one was co-infected with two BF\nrecombinant variants. Prolonged infection with a stable clinical condition was observed\nin the three individuals. Resistance mutation patterns were different between the\npredominant and the minority strains. The analysis of Gag and Gagpol sequences\nshowed, for the first time in Argentina, a high natural polymorphism in subtype F and\nBF recombinants variants in comparison with subtype B isolates. The in vitro evaluation\nof RC of two BF recombinant forms revealed that the recombination in the Gag-\nProtease region was associated with a decrease in viral particles production when\ncompared to the B variant. Furthermore, when challenged with subtype B in a dual\ncompetition assay, the BF variants were less efficient than subtype B, reaching a lower\nfrequency in the viral population in a short period of time.\nIn conclusion, our results show that HIV dual infection can occur with closely related\nsubtypes, and even with different variants of the same recombinant form. The\ncomparison of the primary structure of gag/pol sequences between F1 subtype, BF\nrecombinants variants and B subtype isolates, showed that non-B HIV-1 strain were\nhighly polymorphic in positions related with PI exposure and/or resistance. In addition,\nwe describe for the first time the in vitro dynamics of gag-protease-associated RC of\nHIV-1 intersubtype variants, compared with that of subtype B. This study provides\nevidence that intersubtype recombination in this region might alter viral RC generating\nvariants with reduce fitness.\nFil: Espada, Constanza Eleonora. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaLa situación epidemiológica del Virus de la Inmunodeficiencia Humana tipo I (HIV-1) en\nArgentina, caracterizada por el predominio de subtipo B en hombres que tienen sexo\ncon hombres y de recombinantes BF en la población heterosexual y usuarios de\ndrogas inyectables, ofrece un campo favorable para la presencia de infecciones dobles\nen individuos con conductas de alto riesgo para la infección. La región gag/pol de HIV-\n1 juega un rol fundamental durante el ciclo de replicación viral, incluyendo ensamblado\ny maduración de la partícula viral. Se ha demostrado que la recombinación intersubtipo\nes frecuente en esta región, lo cual podría afectar la capacidad replicativa de las\nvariantes recombinantes en relación a sus parentales. Teniendo en cuenta lo expuesto\nanteriormente, en el presente trabajo nos propusimos analizar a lo largo del tiempo, la\nvariabilidad genómica del HIV-1 en individuos con infección múltiple y sus posibles\nimplicancias en la dinámica de la población viral y evaluar el impacto de la\nrecombinación intersubtipo en la región genómica gag/pol sobre la capacidad\nreplicativa in vitro en modelos de infección simple y de infección doble.\nEl análisis realizado permitió detectar 3 infecciones dobles, dos de ellas\ncorrespondientes a co-infecciones entre variantes de subtipo B y recombinantes BF, y\nla restante a una co-infección con dos variantes recombinantes BF. La condición\nclínica de los tres individuos se mantuvo estable durante el periodo de estudio y el\npatrón de mutaciones de resistencia entre las variantes mayoritarias y minoritarias fue\ndiferente. Por otra parte, el análisis comparativo de la variabilidad aminoacídica de\nsecuencias de Gag y Proteasa mostró, por primera vez en la Argentina, una mayor\nfrecuencia de cambios polimórficos naturales en los aislamientos de subtipo F y\nvariantes recombinantes BF respecto a los de subtipo B. Por último, la evaluación in\nvitro de la capacidad replicativa de dos variantes recombinantes BF reveló que la\nrecombinación en la región Gag-Proteasa estuvo asociada a una disminución en la\nproducción de partículas virales, respecto a su contraparte de subtipo B. Esta\nobservación fue probada en el contexto de un ensayo de competición entre las\nvariantes mencionadas. Los resultados mostraron que la replicación de las variantes\nrecombinantes fue menos eficiente que su contraparte de subtipo B, alcanzando una\nfrecuencia menor en la población viral en un periodo corto de tiempo.\nNuestros resultados sugieren que la sobreinfección es un fenómeno frecuente en\npoblaciones con riesgo múltiple, aún entre variantes muy relacionadas. El estudio de la\nestructura primaria de secuencias de gag/pol provenientes de aislamientos de\nvariantes recombinantes BF, subtipo F y subtipo B mostró que, las dos primeras\npresentaban mayor cantidad de sustituciones en sitios relacionados con exposición y/o\nresistencia a IP. La comparación de la capacidad replicativa in vitro entre variantes\nrecombinantes BF y sus parentales, mostró que la recombinación intersubtipo en la\nregión Gag-Proteasa impacta sobre la capacidad replicativa generando nuevas\nvariantes con menor fitness, respecto a las variantes parentales.\

Viral replication is enhanced by an HIV-1 intersubtype recombination-derived Vpu protein

Background: Multiple HIV-1 intersubtype recombinants have been identified in human populations. Previous studies from our lab group have shown that the epidemic in Argentina is characterized by the high prevalence of a circulating recombinant form, CRF12_BF, and many related BF recombinant forms. In these genomic structures a recombination breakpoint frequently involved the vpu coding region. Due to the scarce knowledge of Vpu participation in the virion release process and its impact on pathogenesis and of the functional capacities of intersubtype recombinant Vpu proteins, the aim of this work was to perform a comparative analysis on virion release capacity and relative replication capacity among viral variants harboring either a BF recombinant Vpu or a subtype B Vpu. Results: Our results showed that BF recombinant Vpu was associated to an increased viral particles production when compared to WT B variant in tetherin-expressing cell lines. This observation was tested in the context of a competition assay between the above mentioned variants. The results showed that the replication of the BF Vpu-harboring variant was more efficient in cell cultures than subtype B, reaching a higher frequency in the viral population in a short period of time. Conclusion: This study showed that as a result of intersubtype recombination, a structurally re-organized HIV-1 Vpu has an improved in vitro capacity of enhancing viral replication, and provides evidence of the changes occurring in this protein function that could play an important role in the successful spread of intersubtype recombinant variants.Fil: de Candia, Cristian Ariel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia Para El Sida; ArgentinaFil: Espada, Constanza Eleonora. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia Para El Sida; ArgentinaFil: Duette, Gabriel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia para el Sida; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ghiglione, Yanina Alexandra. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia para el Sida; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Turk, Gabriela Julia Ana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia para el Sida; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Salomon, Horacio Eduardo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia para el Sida; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carobene, Mauricio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia para el Sida; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Effect of Chia oil (Salvia Hispanica) rich in ω-3 fatty acids on the eicosanoid release, apoptosis and T-lymphocyte tumor infiltration in a murine mammary gland adenocarcinoma

We investigated the effects of certain dietary polyunsaturated fatty acids (PUFAs) and related eicosanoids on the growth and metastasis formation of a murine mammary gland adenocarcinoma. Salvia hispanica (ChO) and Carthamus tinctorius (SaO) vegetable oil sources of omega-3 and -6 PUFAs and a commercial diet as control (CO), were used. We analysed fatty acids of neoplastic cells (NC) membranes by GLC; the eicosanoids 12- HETE and 12-HHT (LOX and COX metabolites) by HPLC and apoptosis and T-lymphocyte infiltration by flow cytometry and microscopy. NC from ChO groups showed lower levels of arachidonic acid and of both eicosanoids compared to SaO and CO (p<0.05). The ChO diet decreased the tumor weight and metastasis number (p<0.05). Apoptosis and T-lymphocyte infiltration were higher and mitosis decreased with respect to the other diets (p<0.05). Present data showed that ChO, an ancient and almost unknown source of omega-3, inhibits growth and metastasis in this tumor model.Fil: Espada, Constanza Eleonora. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Berra, María Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular; ArgentinaFil: Martinez, M. J.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Córdoba. Estación Experimental Agropecuaria Manfredi; ArgentinaFil: Eynard, Aldo Renato. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Pasqualini, María Eugenia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular; Argentin

Detection of HIV-1 dual infections in highly exposed treated patients

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Genetic characterization of HIV-1 in Argentina has shown that BF recombinants predominate among heterosexuals and injecting drug users, while in men who have sex with men the most prevalent form is subtype B.</p> <p>Objectives</p> <p>The aim of this work was to investigate the presence of HIV dual infections in HIV-infected individuals with high probability of reinfection</p> <p>Study design</p> <p>Blood samples were collected from 23 HIV positive patients with the risk of reinfection from Buenos Aires. A fragment of the HIV gene <it>pol </it>was amplified and phylogenetic analyses were performed. Antiretroviral drug resistance patterns of all the sequences were analyzed.</p> <p>Results</p> <p>Five dual infections were detected with four patients coinfected with subtype B and BF recombinants and one patient was coinfected with two BF recombinants presenting different recombination patterns. Prolonged infection with a stable clinical condition was observed in the five individuals. Resistance mutation patterns were different between the predominant and the minority strains.</p> <p>Conclusions</p> <p>Our results show that HIV dual infection can occur with closely related subtypes, and even with different variants of the same recombinant form in certain populations. Clinical observations showed neither aggressive disease progression nor impact on the resistance patterns in the dually-infected patients.</p

Aproximaciones a la comprensión del concepto de herramienta terapéutica a partir de conversaciones con terapeutas ocupacionales

Tesis (Magíster en Terapia Ocupacional, Mención Intervención Psicosocial)El concepto de Herramienta Terapéutica es utilizado por varias disciplinas ligadas a áreas de la salud y las ciencias sociales, por tanto, es un concepto que está presente dentro de las conversaciones de los Terapeutas Ocupacionales, sin embargo, se ha observado que esta inclusión en el lenguaje disciplinar es de modo implícito, ya que su comprensión se ha realizado de modo superficial y de una forma que se podría nominar operativa, pues se hace mención a éste en términos de su uso. Pregunta de Investigación. Por éste motivo es que nace la inquietud de conocer ¿Cómo es comprendido el concepto de Herramienta Terapéutica por los Terapeutas Ocupacional que ejercen actualmente la Terapia Ocupacional? Para poder responder esta pregunta se abordarán las teorizaciones relacionadas al concepto de Herramienta Terapéutica, las cuales hacen referencia, por una parte al concepto de Actividad y Ocupación desde utilización práctica. Y por otra a una visión relacionada con el ámbito académico y disciplinar, de la concepción que se tiene del concepto de "medio terapéutico" acuñado por Laura Rueda, relacionado a la comprensión del "hacer'' en Terapia Ocupacional. La investigación se realizará desde la metodología cualitativa porque la naturaleza del problema a investigar nos invita a pensar que el comprender un concepto, en este caso el de Herramienta Terapéutica, es una práctica social compleja, que es difícil abordarlo desde perspectivas cuantitativas. Para estos se realizará entrevistas semi estructuradas, las cuales estarán guiadas por dos ejes temáticos que apuntan a recabar información en torno a la comprensión que se tiene de este concepto y cómo esta comprensión de Herramienta Terapéutica se ha construido en torno la experiencia profesional. Los datos obtenidos de estas entrevistas, se analizaran por medio del sistema de codificación propuestos por la Teoría Fundamentada, pues este método de producción de resultados nos permitirá sistematizar los datos para la construcción de un modelo comprensivo que nos facilite la comprensión del concepto de Herramienta Terapéutica

Epitranscriptomic <i>N</i> ⁶ -Methyladenosine Profile of SARS-CoV-2-Infected Human Lung Epithelial Cells

Posttranscriptional modification of viral and cellular RNA by N 6 -methyladenosine (m 6 A) plays an important role in regulating the replication of many viruses and the cellular immune response to infection. We therefore sought to define the epitranscriptomic m 6 A profile of human lung epithelial cells infected with SARS-CoV-2. </jats:p

N6-methyladenosine modification of HIV-1 RNA suppresses type-I interferon induction in differentiated monocytic cells and primary macrophages.

N6-methyladenosine (m6A) is a prevalent RNA modification that plays a key role in regulating eukaryotic cellular mRNA functions. RNA m6A modification is regulated by two groups of cellular proteins, writers and erasers that add or remove m6A, respectively. HIV-1 RNA contains m6A modifications that modulate viral infection and gene expression in CD4+ T cells. However, it remains unclear whether m6A modifications of HIV-1 RNA modulate innate immune responses in myeloid cells that are important for antiviral immunity. Here we show that m6A modification of HIV-1 RNA suppresses the expression of antiviral cytokine type-I interferon (IFN-I) in differentiated human monocytic cells and primary monocyte-derived macrophages. Transfection of differentiated monocytic U937 cells with HIV-1 RNA fragments containing a single m6A-modification significantly reduced IFN-I mRNA expression relative to their unmodified RNA counterparts. We generated HIV-1 with altered m6A levels of RNA by manipulating the expression of the m6A erasers (FTO and ALKBH5) or pharmacological inhibition of m6A addition in virus-producing cells, or by treating HIV-1 RNA with recombinant FTO in vitro. HIV-1 RNA transfection or viral infection of differentiated U937 cells and primary macrophages demonstrated that HIV-1 RNA with decreased m6A levels enhanced IFN-I expression, whereas HIV-1 RNA with increased m6A modifications had opposite effects. Our mechanistic studies indicated that m6A of HIV-1 RNA escaped retinoic acid-induced gene I (RIG-I)-mediated RNA sensing and activation of the transcription factors IRF3 and IRF7 that drive IFN-I gene expression. Together, these findings suggest that m6A modifications of HIV-1 RNA evade innate immune sensing in myeloid cells