Análise genética e mutagenese sítio dirigida do gene glnE de Herbaspirillum seropedicae

Orientadores: Maria Berenice Reynaud Steffens, Fábio de Oliveira Pedrosa, Liu Un Rigo, Roseli WasserriMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná.Setor de Ciencias Biologicas. Curso de Graduaçao em Ciencias BiologicasResumo : GlnE é uma enzima efetora bifuncional que atua regulando a cascata do metabolismo de nitrogênio controlando a atividade da enzima Glutamina Sintetase (GS). GS é uma das enzimas centrais envolvidas na assimilação de nitrogênio catalisando a conversão de glutamato e amônio em glutamina. A proteína GlnE regula a atividade enzimática de GS através da adenililação/desadenilidação de suas subunidades. Em H. seropedicae, uma bactéria diazotrófica endofitica, o gene glnE foi identificado durante o programa de sequenciamento genômico (GENOP AR). Nesse organismo, o gene glnE codifica para uma proteína de 927 aminoácidos que apresenta alta similaridade com o gene glnE de outros organismos. O gene glnE é, aparentemente, monocistrônico e constitutivamente expresso. Dois domínios homólogos conservados foram identificados na proteína GlnE: um na região Cterminal que possui o sítio de desadenililação e outro na região C-terminal que possui o sítio de adenililação. Um cassete de canamicina foi clnserido no gene glnE clonado no vetor pUC18. O plasmídeo resultante (PHF16), foi eletroporado na estirpe selvagem SMRl de H seropedicae gerando duas estirpes mutantes por inserção cromossomal (HEL 1 e HEL2). O mutante HEL 1 apresentou atividade nitrogenase reduzida em relação à estirpe selvagem SMRl

Prospecção metagenômica de biocatalisadores da microbiota de solos da Floresta Atlântica paranaense

Resumo: A diversidade bacteriana do solo e seu potencial biotecnologico sao pouco explorados. Dados indicam que 1 g de solo contem mais de 10 bilhoes de micro-organismos distribuidos em milhares de especies. Entretanto, a grande maioria dessas especies sao desconhecidas devido a sua inabilidade de se multiplicar nos meios de cultivo tradicionalmente usados em laboratorio. A Metagenomica tornou possivel o acesso a essa vasta diversidade genetica permitindo a analise direta do DNA de uma comunidade bacteriana e levando a descoberta de novos biocatalisadores. Nesse trabalho sao descritas a construcao de tres bibliotecas metagenomicas, a prospeccao por novos biocatalisadores e a caracterizacao de uma nova lipase identificada nessas bibliotecas. As bibliotecas foram construidas a partir de amostras de solo da Floresta Atlantica Paranaense coletadas em diferentes altitudes. O DNA das amostras de solo foi purificado, reparado e clonado no vetor pCC2FOS. Os fosmideos recombinantes foram transformados na estirpe EPI300 de Escherichia coli gerando as bibliotecas metagenomicas MAF1, MAF2 e MAF3 com 34.560, 29.280 e 36.288 clones, respectivamente. Todos os clones foram analisados quanto a atividade triacil-hidrolasica em tributirina (315 clones positivos), tricaprilina (10 clones positivos) e trioleina (3 clones positivos). Os clones da biblioteca MAF1 tambem foram analisados quanto a atividade de protease (460 clones positivos) e atividade de amilase (4 clones positivos). O DNA inserto dos clones com atividade lipolitica MAF1LP001, MAF1LP018 e MAF1LP090 foram sequenciados, o que permitiu identificar 80 ORFs/genes. A lipase LP001ORF27 foi identificada como membro da familia I das lipases e similaridade proxima a subfamilia termofilica I.5. A enzima purificada apresenta atividade contra diferentes para-nitrofenil-monoacilesteres (pNP monoacilesteres) com atividade maxima (7 U/mg) contra pNP decanoato. LP001ORF27 apresentou atividade do pH 5,0 ao 11,0, com atividade otima em pH 7,0 e nao apresentou dependencia de metais. A temperatura otima de atividade ocorreu na faixa de 50-60oC e a enzima apresentou ativacao termica de 80% apos incubacao por 1 hora a 50oC. A lipase LP018ORF16 nao apresentou similaridade com sequencias de lipases conhecidas e a analise filogenetica sugeriu que ela constitui uma nova familia. Essa enzima tambem demonstrou dependencia da proteina LP018ORF15, provavelmente uma chaperona, para atividade. LP090ORF24 foi identificada como membro da familia I das lipases, proxima a subfamilia I.2, e tambem apresenta similaridade com uma poli-hidroxialcanoato (PHA) depolimerase. Proximo a LP090ORF24 foi identificado um gene que codifica uma Ą-amilase. Finalmente, a analise da sequencia dessa proteina sugeriu que ela contem um dominio de ciclodextrina glicosiltansferase (CGTase). Os resultados obtidos nesse trabalho confirmam o potencial da Metagenomica para a descoberta de novas enzimas de importancia biotecnologica

Avaliação do desempenho de sistemas de zona de raízes (wetlands construídas) em escala piloto aplicados ao tratamento de efluente sintético

Technological arrangements that integrate systems root zone are presented as plausible option for effluents treatment, mainly because of their simplicity in construction, low cost of implementation/operation and efficiency in removing pollutants. These systems act as biological filters planted with macrophytes, applied to the treatment of domestic and industrial sewage. The present study aimed at the construction and monitoring of two pilot systems for sewage treatment of the roots zones of free vertical hydraulic flow and drowned, mounted in plastic containers with a total volume of 220L each. They were cultivated plant species Canna x generalis LH Bailey (cana indica), heliophytic rhizomatous plant with ornamental foliage and colorful flowers, grown on the support medium with layers of gravel and sand. The systems were fed synthetic substrate with glucose as carbon source, under hydraulic application rate of 125,8 L.m-2.day-1 an organic material and in terms of COD of 300,93± mg.L-1. The drowned system flow had removal efficiencies of Total Kjeldahl Nitrogen, COD and PO4 de, 55±17%, 95±6% e 46±11%respectively. In the system of free flow efficiencies for Total Kjeldahl Nitrogen removal, COD and PO4 were 57 ± 11%, 96 ± 6% and 41 ± 11%, showing high removal of organic matter and nutrients for the two models studied.CAPESArranjos tecnológicos que integram sistemas de zona de raízes apresentam-se como uma opção plausível para adequação de efluentes, devido principalmente a sua simplicidade construtiva, baixo custo de implantação/operação e eficiência na remoção de poluentes. Estes sistemas atuam como filtros biológicos cultivados com macrófitas aquáticas, aplicados ao tratamento de esgotos domésticos e industriais. O presente estudo teve por objetivo a construção e o monitoramento de dois sistemas pilotos de tratamento de esgotos por zonas de raízes de fluxo hidráulico vertical livre e afogado, montados em recipientes plásticos com volume total de 220L cada. Neles foi cultivada a espécie vegetal Canna x generalis L.H Bailey (cana- indica), planta heliófita rizomatosa, com folhagens ornamentais e de inflorescências coloridas, cultivada sobre meio suporte com camadas de brita e areia. Os sistemas foram alimentados com substrato sintético tendo glicose como fonte de carbono, sob taxa hidráulica de aplicação de 125,8 L.m-2.dia-1 e matéria orgânica em termos de DQO de 300,93± mg.L-1. O sistema de fluxo afogado apresentou eficiências na remoção de Nitrogênio Total Kjeldahl, DQO e PO 4 de, 55±17%, 95±6% e 46±11% respectivamente. No sistema de fluxo livre as eficiências para remoção de Nitrogênio Total Kjeldahl, DQO e PO4 foram de 57±11%, 96±6% e 41±11%, demonstrando elevada remoção de matéria orgânica e nutrientes para os dois modelos estudados

UM OLHAR SOBRE PEQUENAS CIDADES: A EXPANSÃO E REESTRUTURAÇÃO DO IF SUDESTE DE MINAS GERAIS, CAMPUS RIO POMBA

O trabalho traz à luz pesquisa empreendida no município de Rio Pomba, mesorregião da Zona da Mata de Minas Gerais. Figurando na alcunha de pequena cidade, Rio Pomba passa por substanciais mudanças em sua dinâmica espacial, a partir da repercussão do Programa REUNI do governo federal, que colaborou na expansão e reestruturação de um dos campi do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Sudeste de MG, localizado no município. Tem-se por intuito analisar as profundas modificações que o processo traz para a cidade numa tentativa de elucidar uma manifestação mais ampla, posto que muitas pequenas e médias cidades são alvo do processo de interiorização dos Institutos Federais na década atual, de acordo com os rumos tomados pela educação superior brasileira desde a década de 1990

BREVES CONSIDERAÇÕES SOBRE A INTERFERÊNCIA DA IGREJA CATÓLICA NO RECONHECIMENTO DOS NOVOS MODELOS FAMILIARES

O direito das famílias está intrinsecamente relacionado com a ideia de religião, principalmente a religião católica, o direito apresentou-se como um divisor entre o conceito de família religioso e o conceito de família social, que é lastreado pelas normas jurídica atuais. A influência da igreja católica apostólica romana no direito das famílias é de fundamental importância para a definição e reconhecimento dos novos modelos famílias, tendo por base que aquela é a maior entidade religiosa do Brasil e por sua vez apresenta-se ainda como uma entidade reguladora da moral e da ética. O presente projeto objetiva encontrar um contraponto da extensão da influencia da igreja na configuração dos novos e inexplorados modelos famílias. O método a ser utilizado é o teórico e histórico, aquele analisará documentos jurídicos, doutrinas e leis enquanto aquele demostrará o escorço da luta pelo reconhecimento dos novos modelos familiares no Brasil

Flowering and production of Palmer mango trees under organic compound and paclobutrazol application

The objective of this work was to evaluate the effects of applications of humified organic compound rates combined with paclobutrazol (PBZ) rates on the flowering, production, and fruit quality of Palmer mango trees grown in two production seasons (Seasons 1 and 2). Two experiments were conducted in different production seasons and areas in Matias Cardoso, MG, Brazil. A randomized block experimental design with four replications was used, in a 4×2+1 factorial arrangement, consisted of 4 humidified organic compound rates (10, 15, 20, and 25 mL plant-1), 2 PBZ rates (0.7 and 0.85 g per meter of canopy diameter), and a control (application of PBZ at 0.85 g per meter of canopy diameter). Vegetative, physiological, reproductive, production, and post-harvest fruit quality characteristics were evaluated. The data were subjected to analysis of variance and regression or mean tests. The treatments had significant effects on some characteristics in Season 1. Plants treated with the organic compound combined with PBZ had higher chlorophyll contents than those in the control. The increase in the organic compound rate linearly increased the total number of flowers and number of male flowers per axillary panicle, but decreased soluble solids content. The application of the lowest PBZ rate resulted in higher soluble solids content and titratable acidity in mango fruits. The treatments did not affect the evaluated characteristics in Season 2. The application of humidified organic compound combined with paclobutrazol showed no benefits for the management of floral induction in Palmer mango trees.The objective of this work was to evaluate the effects of applications of humified organic compound rates combined with paclobutrazol (PBZ) rates on the flowering, production, and fruit quality of Palmer mango trees grown in two production seasons (Seasons 1 and 2). Two experiments were conducted in different production seasons and areas in Matias Cardoso, MG, Brazil. A randomized block experimental design with four replications was used, in a 4×2+1 factorial arrangement, consisted of 4 humidified organic compound rates (10, 15, 20, and 25 mL plant-1), 2 PBZ rates (0.7 and 0.85 g per meter of canopy diameter), and a control (application of PBZ at 0.85 g per meter of canopy diameter). Vegetative, physiological, reproductive, production, and post-harvest fruit quality characteristics were evaluated. The data were subjected to analysis of variance and regression or mean tests. The treatments had significant effects on some characteristics in Season 1. Plants treated with the organic compound combined with PBZ had higher chlorophyll contents than those in the control. The increase in the organic compound rate linearly increased the total number of flowers and number of male flowers per axillary panicle, but decreased soluble solids content. The application of the lowest PBZ rate resulted in higher soluble solids content and titratable acidity in mango fruits. The treatments did not affect the evaluated characteristics in Season 2. The application of humidified organic compound combined with paclobutrazol showed no benefits for the management of floral induction in Palmer mango trees

A reflexividade do professor e os desafios no ensino remoto de matemática em Paranaíba/MS

Este resumo apresenta uma obra em andamento, com resultados parciais sobre a reflexividade do professor baseada nos estudos de Donald Schön[1], visto que o teórico abordava na maioria de suas pesquisas, um contextualizado estudo sobre profissional reflexivo. Analisando a educação atual, especificamente o professor que ensina matemática no âmbito da educação básica, refletimos também com o momento em que nossa sociedade está assolada pela Pandemia do Corona Vírus, possibilitando que as aulas sejam de caráter remoto, o que justifica os desafios. O objetivo geral deste estudo é investigar o professor reflexivo, e os desafios de ensinar matemática em uma escola pública da rede estadual. Os objetivos específicos visam contextualizar algumas obras de Donald Schön com real momento em que vivemos e detalhar o trabalho de um grupo colaborativo de pesquisa de uma escola do município de Paranaíba/MS. A metodologia utilizada fora à pesquisa de campo em uma abordagem predominantemente qualitativa. Na fundamentação teórica do artigo, a intenção foi expor a fala de teóricos que contextualizam o ensino de matemática; sobre o professor reflexivo; sobre os estudos de Donald Schön e os desafios do ensino remoto no âmbito escolar. Os resultados obtidos parcialmente com a pesquisa foram frutos de investigação e entrevistas no grupo colaborativo citado acima, com encontros quinzenais feitos via internet, exposições reflexivas sobre os desafios e estratégias de ensinar matemática no segundo semestre de 2021 através do ensino remoto. Considerando o trabalho, percebemos que o professor que ensina matemática está cada dia mais propício a fazer uma reflexão sobre sua prática e principalmente sobre sua formação.   [1] Donald Schön foi um Filósofo e Pedagogo estadunidense que estudou sobre a reflexão na educação, sendo pioneiro no desenvolvimento do conceito “ciência-ação” (SHIGUNOV,2017)

A reflexividade do professor e os desafios no ensino remoto de matemática em Paranaíba/MS

Este resumo apresenta uma obra em andamento, com resultados parciais sobre a reflexividade do professor baseada nos estudos de Donald Schön[1], visto que o teórico abordava na maioria de suas pesquisas, um contextualizado estudo sobre profissional reflexivo. Analisando a educação atual, especificamente o professor que ensina matemática no âmbito da educação básica, refletimos também com o momento em que nossa sociedade está assolada pela Pandemia do Corona Vírus, possibilitando que as aulas sejam de caráter remoto, o que justifica os desafios. O objetivo geral deste estudo é investigar o professor reflexivo, e os desafios de ensinar matemática em uma escola pública da rede estadual. Os objetivos específicos visam contextualizar algumas obras de Donald Schön com real momento em que vivemos e detalhar o trabalho de um grupo colaborativo de pesquisa de uma escola do município de Paranaíba/MS. A metodologia utilizada fora à pesquisa de campo em uma abordagem predominantemente qualitativa. Na fundamentação teórica do artigo, a intenção foi expor a fala de teóricos que contextualizam o ensino de matemática; sobre o professor reflexivo; sobre os estudos de Donald Schön e os desafios do ensino remoto no âmbito escolar. Os resultados obtidos parcialmente com a pesquisa foram frutos de investigação e entrevistas no grupo colaborativo citado acima, com encontros quinzenais feitos via internet, exposições reflexivas sobre os desafios e estratégias de ensinar matemática no segundo semestre de 2021 através do ensino remoto. Considerando o trabalho, percebemos que o professor que ensina matemática está cada dia mais propício a fazer uma reflexão sobre sua prática e principalmente sobre sua formação.   [1] Donald Schön foi um Filósofo e Pedagogo estadunidense que estudou sobre a reflexão na educação, sendo pioneiro no desenvolvimento do conceito “ciência-ação” (SHIGUNOV,2017)

Identification and characterization of a new true lipase isolated through metagenomic approach

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Metagenomics, the application of molecular genomics to consortia of non-cultivated microbes, has the potential to have a substantial impact on the search for novel industrial enzymes such as esterases (carboxyl ester hydrolases, EC 3.1.1.1) and lipases (triacylglycerol lipases, EC 3.1.1.3). In the current work, a novel lipase gene was identified from a fosmid metagenomic library constructed with the "prokaryotic-enriched" DNA from a fat-contaminated soil collected from a wastewater treatment plant.</p> <p>Results</p> <p>In preliminary screening on agar containing 1% tributyrin, 2661 of the approximately 500,000 clones in the metagenomic library showed activity. Of these, 127 showed activity on agar containing 1% tricaprylin, while 32 were shown to be true lipase producers through screening on agar containing 1% triolein. The clone with the largest halo was further characterized. Its lipase gene showed 72% identity to a putative lipase of <it>Yersinia enterocolitica </it>subsp. <it>palearctica </it>Y11. The lipase, named LipC12, belongs to family I.1 of bacterial lipases, has a chaperone-independent folding, does not possess disulfide bridges and is calcium ion dependent. It is stable from pH 6 to 11 and has activity from pH 4.5 to 10, with higher activities at alkaline pH values. LipC12 is stable up to 3.7 M NaCl and from 20 to 50°C, with maximum activity at 30°C over a 1 h incubation. The pure enzyme has specific activities of 1722 U/mg and 1767 U/mg against olive oil and pig fat, respectively. Moreover, it is highly stable in organic solvents at 15% and 30% (v/v).</p> <p>Conclusions</p> <p>The combination of the use of a fat-contaminated soil, enrichment of prokaryotic DNA and a three-step screening strategy led to a high number of lipase-producing clones in the metagenomic library. The most notable properties of the new lipase that was isolated and characterized were a high specific activity against long chain triacylglycerols, activity and stability over a wide range of pH values, good thermal stability and stability in water-miscible organic solvents and at high salt concentrations. These characteristics suggest that this lipase has potential to perform well in biocatalytic processes, such as for hydrolysis and synthesis reactions involving long-chain triacylglycerols and fatty acid esters.</p

RELAÇÃO ENTRE PODAS E ASPECTOS FITOSSANITÁRIOS EM ÁRVORES URBANAS NA CIDADE DE LUIZIANA, PARANÁ

A arborização urbana proporciona benefícios de ordem física, social e ecológica, desde que a árvore apresente-se saudável. Visto que o ambiente urbano não é propicio ao cultivo de árvores, faz-se necessária a adoção de práticas de manejo adequadas para assegurar a saúde da planta. O objetivo dessa pesquisa foi diagnosticar as práticas de podas efetuadas nas árvores viárias da cidade de Luiziana, Paraná, e a possível relação entre essa medida e os aspectos fitossanitários das árvores. Utilizou-se ficha de campo para levantar fatores in loco referente ao tipo de poda efetuada, ao ataque de pragas e à incidência de patógenos na planta. Analisaram-se 1540 árvores na área central da cidade. Constatou-se que a poda drástica é o tipo de poda mais utilizada e 72% das árvores apresentam-se aparentemente sadias. Cerca de 50% dos indivíduos que sofreram poda drástica apresentaram sinais de ataque por pragas e doenças, o que corrobora a relação entre poda e fitossanidade. A espécie mais afetada pela poda drástica (Ligustrum lucidum) é também a espécie de maior predominância na população e com os maiores índices de ataque por patógenos e pragas