Improved synthesis of phytanyl α-D-cellobiosyldiphosphate as substrate for α-D-mannosyltransferase

Polyisoprenyl-pyrophosphate-linked cellobiose is the natural acceptor of the α-1,3- mannosyltransferase AceA from Acetobacter xylinum, which transfers mannose from GDPmannose during the assembly of the heptasaccharide repeat unit of the exopolysaccharide acetan. Phytanyl α-D-cellobiosyldiphosphate 4 has been previously synthesized as an analogue acceptor by condensation of hepta-O-acetyl-α-D-cellobiosylphosphate 1 with phytanylphosphate 2, but the procedure was briefly described. We report here a modified detailed synthesis of 4. The complete NMR characterization of 4 is provided and also a selection of NMR signals of all the intermediate compounds which facilitate monitoring the synthesis.Fil: Barrios, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; ArgentinaFil: Ielpi, Luis. Fundación Instituto Leloir; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquimicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Marino, Carla. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Centro de Investigaciones en Hidratos de Carbono; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; Argentin

Biophysical characterization of the outer membrane polysaccharide export protein and the polysaccharide co-polymerase protein from Xanthomonas campestris

This study investigated the structural and biophysical characteristics of GumB and GumC, two Xanthomonas campestris membrane proteins that are involved in xanthan biosynthesis. Xanthan is an exopolysaccharide that is thought to be a virulence factor that contributes to bacterial in planta growth. It also is one of the most important industrial biopolymers. The first steps of xanthan biosynthesis are well understood, but the polymerization and export mechanisms remain unclear. For this reason, the key proteins must be characterized to better understand these processes. Here we characterized, by biochemical and biophysical techniques, GumB, the outer membrane polysaccharide export protein, and GumC, the polysaccharide co-polymerase protein of the xanthan biosynthesis system. Our results suggested that recombinant GumB is a tetrameric protein in solution. On the other hand, we observed that both native and recombinant GumC present oligomeric conformation consistent with dimers and higher-order oligomers. The transmembrane segments of GumC are required for GumC expression and/or stability. These initial results provide a starting point for additional studies that will clarify the roles of GumB and GumC in the xanthan polymerization and export processes and further elucidate their functions and mechanisms of action.Fil: Bianco, María Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Jacobs, Melisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Salinas, Silvina Rosa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Salvay, Andrés Gerardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Física de Líquidos y Sistemas Biológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Física de Líquidos y Sistemas Biológicos; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Ielmini, M. V.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Ielpi, Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentin

A Novel 3-Methyladenine DNA Glycosylase from Helicobacter pylori Defines a New Class within the Endonuclease III Family of Base Excision Repair Glycosylases

The cloning, purification, and characterization of MagIII, a 3-methyladenine DNA glycosylase from Helicobacter pylori, is presented in this paper. Sequence analysis of the genome of this pathogen failed to identify open reading frames potentially coding for proteins with a 3-methyladenine DNA glycosylase activity. The putative product of the HP602 open reading frame, reported as an endonuclease III, shares extensive amino acid sequence homology with some bacterial members of this family and has the canonic active site helix-hairpin-helix-GPD motif. Surprisingly, this predicted H. pylori endonuclease III encodes a 25,220-Da protein able to release 3-methyladenine, but not oxidized bases, from modified DNA. MagIII has no abasic site lyase activity and displays the substrate specificity of the 3-methyladenine-DNA glycosylase type I of Escherichia coli (Tag) because it is not able to recognize 7-methylguanine or hypoxanthine as substrates. The expression of the magIII open reading frame in null 3-methyladenine glycosylase E. coli (tag alkA) restores to this mutant partial resistance to alkylating agents. MagIII-deficient H. pylori cells show an alkylation-sensitive phenotype. H. pylori wild type cells exposed to alkylating agents present an adaptive response by inducing the expression of magIII. MagIII is thus a novel bacterial member of the endonuclease III family, which displays biochemical properties not described for any of the members of this group until now.Fil: O'Rourke, Eyleen J.. Centre National de la Recherche Scientifique; Francia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Chevalier, Catherine. Instituto Pasteur; FranciaFil: Boiteux, Serge. Centre National de la Recherche Scientifique; FranciaFil: Labigne, Agnès. Instituto Pasteur; FranciaFil: Ielpi, Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Radicella, Juan Pablo. Centre National de la Recherche Scientifique; Franci

Xanthan pyruvilation is essential for the virulence of Xanthomonas campestris pv. campestris

Xanthan, the main exopolysaccharide (EPS) synthesized by Xanthomonas spp., contributes to bacterial stress tolerance and enhances attachment to plant surfaces by helping in biofilm formation. Therefore, xanthan is essential for successful colonization and growth in planta and has also been proposed to be involved in the promotion of pathogenesis by calcium ion chelation and, hence, in the suppression of the plant defense responses in which this cation acts as a signal. The aim of this work was to study the relationship between xanthan structure and its role as a virulence factor. We analyzed four Xanthomonas campestris pv. campestris mutants that synthesize structural variants of xanthan. We found that the lack of acetyl groups that decorate the internal mannose residues, ketal-pyruvate groups, and external mannose residues affects bacterial adhesion and biofilm architecture. In addition, the mutants that synthesized EPS without pyruvilation or without the external mannose residues did not develop disease symptoms in Arabidopsis thaliana. We also observed that the presence of the external mannose residues and, hence, pyruvilation is required for xanthan to suppress callose deposition as well as to interfere with stomatal defense. In conclusion, pyruvilation of xanthan seems to be essential for Xanthomonas campestris pv. campestris virulence.Fil: Bianco, María Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: Toum, Laila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: Yaryura, Pablo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones y Transferencia de Villa María. Universidad Nacional de Villa María. Centro de Investigaciones y Transferencia de Villa María; ArgentinaFil: Mielnichuk, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; ArgentinaFil: Gudesblat, Gustavo Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Biodiversidad y Biología Experimental y Aplicada; ArgentinaFil: Roeschlin, Roxana Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Marano, María Rosa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Ielpi, Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Vojnov, Adrián Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Ciencia y Tecnología "Dr. César Milstein". Fundación Pablo Cassará. Instituto de Ciencia y Tecnología ; Argentin

Model for the formation of single-thread rivers in barren landscapes and implications for pre-Silurian and martian fluvial deposits

Flume experiments and field observations show that bank vegetation promotes the formation of narrow and deep single‐thread channels by strengthening riverbanks. Consistent with this idea, the pre‐Silurian fluvial record generally consists of wide monotonous sand bodies often interpreted as deposits of shallow braided rivers, whereas single‐thread rivers with muddy floodplains become more recognizable in Silurian and younger rocks. This shift in the architecture of fluvial deposits has been interpreted as reflecting the rise of single‐thread rivers enabled by plant life. The deposits of some single‐thread rivers, however, have been recognized in pre‐Silurian rocks, and recent field studies have identified meandering rivers in modern unvegetated environments. Furthermore, single‐thread‐river deposits have been identified on Mars, where macroscopic plants most likely never evolved. Here, we seek to understand the formation of those rarely recognized and poorly characterized single‐thread rivers in unvegetated landscapes. Specifically, we quantitatively explore the hypothesis that cohesive muddy banks alone may enable the formation of single‐thread rivers in the absence of plants. We combine open‐channel hydraulics and a physics‐based erosion model applicable to a variety of bank sediments to predict the formation of unvegetated single‐thread rivers. Consistent with recent flume experiments and field observations, results indicate that single‐thread rivers may form readily within muddy banks. Our model has direct implications for the quantification of riverbank strengthening by vegetation, understanding the hydraulic geometry of modern and ancient unvegetated rivers, interpreting pre‐Silurian fluvial deposits, and unraveling the hydrologic and climate history of Mars

Isolation and nucleotide sequence of the GDP-mannose:cellobiosyl- diphosphopolyprenol α-mannosyltransferase gene from Acetobacter xylinum

A genetic locus from Acetobacter xylinum involved in acetan polysaccharide synthesis has been characterized. The chromosomal region was identified by screening a genomic library of A. xylinum in a Xanthomonas campestris mutant defective in xanthan polysaccharide synthesis. The A. xylinum cosmid clone can functionally complement a xanthan-negative mutant. The polymer produced by the recombinant strain was found to be indistinguishable from xanthan. Insertion mutagenesis and subcloning of the cosmid clone combined with complementation studies allowed the identification of a 2.3-kb fragment of A. xylinum chromosomal DNA. The nucleotide sequence of this fragment was analyzed and found to contain an open reading frame (aceA) of 1,182 bp encoding a protein of 43.2 kDa. Results from biochemical and genetic analyses strongly suggest that the aceA gene encodes the GDP- mannose:cellobiosyl-diphosphopolyprenol α-mannosyltransferase enzyme, which is responsible for the transfer of an α-mannosyl residue from GDP-Man to cellobiosyl-diphosphopolyprenol. A search for similarities with other known mannosyltransferases revealed that all bacterial α-mannosyltransferases have a short COOH-termina1 amino acid sequence in common.Fil:Petroni, E.A. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Ielpi, L. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

A novel galacturonide from Xanthomonas campestris

Enzyme preparations from Xanthomonas campestris incubated in the presence of UDP-[14C]GlcA and Mg2+ produced a lipophilic galacturonide with unusual properties. It was easily degraded by both mild acid treatment (0.01 M-HCl, 100°C, 10 min) and mild alkali treatment (0.06 M-NaOH, room temperature, 5 min) releasing free [14C]galacturonic acid. The galacturonide appeared to be a single compound with one negative charge, as judged by TLC, paper electrophoresis and chromotography, LH-20 gel filtration and DEAE-cellulose column chromatography. Competition experiments indicated that the true glycosyl donor was UDP-GalA, in agreement with the detection of UDP-GlcA-4-epimerase activity in the crude enzyme preparation. The transglycosidase activity was located mainly in the membrane fraction. UDP inhibited the reaction and even produced some loss of label, suggesting an easily reversible reaction. UMP had almost no effect.Fil:Baldessari, A. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Ielpi, L. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Dankert, M.A. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Prenol-fosfo-azúcares : Su participación en la biosíntesis de polisacáridos bacterianos

En nuestro laboratorio, trabajando con Acetobacter xylinum se habia descripto la formación "in vitro” de varios lípido-azúcares. Los resuitados encontrados se resumen en el diagrama I. (Ver diagrama I en la tesis) Diagrama I: Reacciones previamente caracterizadas en el sistema de Acetobacter xylinum. Las flechas de puntos indican reacciones probables pero no probadas. Por otra parte además de celulosa (el principal poiisacárido que sintetiza Acetobacter xylinum) se habia aislado del sobrenadante de los medios de cultivo un polisacárido aniónico, que denominamos acetano, compuesto por glucosa, manosa, ramnosa y ácido glucurónico. En esta Tesis, empleando preparados enzimáticos de A. xylinum y uti1izando UDP-glucosa como dador de glucosa, se estudió la reacción 2', es decir 1a participación de glucosa difosfato prenol en la biosintesis del glucano. Los resu1tados obtenidos señalan que UDP-glucosa es un precursor directo del glucano, aunque no descartan la participación en alguna medida de glucosa difosfato prenol en la biosintesis del mismo. Por otra parte se estudió la estructura del polisacárido, acetano, lo que permitió proponer para el mismo la unidad repetitiva siguiente: (Ver diagrama en la tesis) Este resultado nos permitió reforzar suposiciones previas, es decir que el acetano es el destino final del heptasacárido difosfato prenol (producto de la reacción 7, diagrama I). El trabajo principal se centró en el estudio de la biosintesis del exopolisacárido xantano de estructura similar a la del acetano, y producido por la bacteria Xanthomonas campestris. Empleando preparados enzimáticos de dicha bacteria y distintos nucleótido-azücares se investigó la formación "in vitro" de lipido-azücares y su relación con el polisacárido xantano. Se estudiaron además los compuestos que actuaban como dadores de los grupos acetato y piruvato (dos grupos que forman parte en la estructura del po1isacárido), asi como sus posibles aceptores. Los resultados obtenidos se resumen en el diagrama II. (Ver diagrama II en la tesis) Diagrama II: Resultados obtenidos can el sistema de Xanthornonas campestris. Se determinó la estructura de los lipido-oligosacáridos formados por las reacciones 2,3,4,5 y 6, asi como la relación entre los distintos compuestos mostrados en el Diagrama II. La mayoria de los mismos se pudieron obtener a partir del precursor marcado obtenido "in situ" y los dadores necesarios no radioactivos. Utilizando (β-32P)UDP-glucosa se obtuvieron los compuestos formados por las reacciones 2,3 y 5, con marca en 32P, indicando la transferencia de P como P-glucosa. Se estableció que el acetil-CoA es el dador del grupo acetilo y que el ácido fosfoenolpirüvico lo es del grupo piruvato, siendo ésta la primera vez que se describen lipidos intermediarios acetilados o piruvilados obtenidos "in vitro". La relación entre el producto final, xantano, y los productos formados por las reacciones 5 y 6 se estableció por incubaciones realizadas a partir de dichos precursores radioactivosobtenidos "in situ". Se encontró de esta manera, que el producto de la reacción 6 (la unidad repetitiva piruvilada asociada al lipido difosfato) solo puede ser polimerizado si en la reacción está presente el producto de la reacción 5 (la unidad repetitiva asociada al lipido difosfato). No se determinaron las funciones de glucosa-P-prenol (producto de la reacción I') y del lipido glucurónico (producto de la reacción 4'), pero no parecen estar involucrados en la formación de xantano.Fil: Ielpi, Luis. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Anton Webern: Klangfarbenmelodien y funciones estructurales del timbre

El tratamiento del timbre en la música de Anton Webern ha sido descripto frecuentemente como la puesta en práctica del concepto de Klangfarbenmelodie (melodía de timbres) que formulara Arnold Schoenberg en el Tratado de armonía de 1911. No obstante, y desatendiendo sus implicancias, tienden a englobarse bajo dicha noción recursos y procedimientos tan dispares como lo son las técnicas extendidas de ejecución, criterios inusuales de instrumentación y otros. En los dos ejemplos que aquí analizamos, las innovaciones en los procedimientos de instrumentación, cotejadas con el pensamiento musical formulado por el propio compositor, nos llevan a considerarlas como instancias en las que el aspecto tímbrico da cuenta de la propia estructura motívica y formal en un grado al menos tan importante como las alturas.Eje 3: El discurso musical desde una perspectiva analítica, cognitiva e histórico-socialFacultad de Bellas Arte

Músicas paralelas : valoraciones diferenciadas de la modernidad artística en la caracterización de las músicas urbanas y académicas de Buenos Aires (1920 – 1945)

Hacia 1920 se hallaba ya consolidada en Buenos Aires una de las diversas ramificaciones del proyecto civilizador de la Generación del '80. Esto es, la edificación de unas instituciones musicales que contribuyeran a la constitución de un moderno Estado Nación. En ellas, y en paralelo a una enorme cantidad de músicas urbanas surgidas del complejo contexto de la inmigración, la élite porteña produjo realizaciones no sólo de autores internacionales reconocidos sino también de creadores locales. Sus nombres hoy constituyen, precisamente, el canon historiográfico musical de la Argentina hasta por lo menos 1950/60. Considerando la vastedad del repertorio y lo que Carl Dahlhaus denomina la relativa autonomía de la obra, la musicología histórica tradicional de sesgo formalista adoptó dos criterios centrales a la hora de seleccionar sus temáticas a abordar. En primer lugar, el privilegio de un repertorio del pasado con cierta “presencia estética" (Dahlhaus, 1997, 47) en el presente; en segundo término, el carácter de innovador que ese repertorio pudo haber tenido respecto de otras prácticas de su tiempo. Desde ese punto de vista, la ausencia del grupo de músicas englobables bajo el término tango en las formulaciones tradicionales acerca de la Historia de la música argentina, sobre todo a partir de 1920, nos lleva a interrogar el canon establecido. La fuerte presencia internacional del tango en la contemporaneidad, sumado a rasgos que efectivamente dan cuenta de una práctica musical dinámica e innovadora redundan, creemos, en un estilo musical perfectamente analizable bajo el paradigma de la musicología histórica en un grado al menos tan importante como el del canon establecido. Finalmente, el reabordaje del propio canon histórico musical argentino bajo ese prisma, y a partir de la teoría decolonial fundamentada por Walter D. Mignolo y la caracterización de las ideas en torno al modernismo musical llevadas a cabo por Omar Corrado, nos llevan a revisar su centralidad; a interrogarnos por su limitación casi exclusiva al repertorio académico; y a entenderlo como el resultado de las propias limitaciones de la musicología local a la hora de abordar los fenómenos musicales híbridos que la circundaban.Fil: Ielpi, José Francisco. Universidad Nacional de La Plat