Kinetics and Inhibition Studies of the L205R Mutant of cAMP-Dependent Protein Kinase Involved in Cushing’s Syndrome

Overproduction of cortisol by the hypothalamus–pituitary–adrenal hormone system results in the clinical disorder known as Cushing\u27s syndrome. Genomics studies have identified a key mutation (L205R) in the α‐isoform of the catalytic subunit of cAMP‐dependent protein kinase (PKACα) in adrenal adenomas of patients with adrenocorticotropic hormone‐independent Cushing\u27s syndrome. Here, we conducted kinetics and inhibition studies on the L205R‐PKACα mutant. We have found that the L205R mutation affects the kinetics of both Kemptide and ATP as substrates, decreasing the catalytic efficiency (kcat/KM) for each substrate by 12‐fold and 4.5‐fold, respectively. We have also determined the IC50 and Ki for the peptide substrate‐competitive inhibitor PKI(5–24) and the ATP‐competitive inhibitor H89. The L205R mutation had no effect on the potency of H89, but causes a \u3e 250‐fold loss in potency for PKI(5–24). Collectively, these data provide insights for the development of L205R‐PKACα inhibitors as potential therapeutics

Towards a clinical trial ontology using a concern-oriented approach

Not yet availablePer ridurre i costi e migliorare la qualita\u27 della ricerca nei trial clinici (CT) e\u27 necessario un approccio piu\u27 sistematico all\u27automazione dei CT per rinforzare l\u27interoperabilita\u27 a vari livelli del processo di ricerca. Per questo scopo e\u27 stato sviluppato un modello concettuale di CT. Alla base di ogni approccio di modellizzazione ci sono criteri di partizione che ci permettono di dominare la complessita\u27 dell\u27universo da modellare. In questo rapporto noi introduciamo un metodo originale di analisi basato sui concern degli stakeholder per partizionare il domino concettuale dei CT in sotto-domini orientati agli stakeholder. Le rappresentazioni mentali degli stakeholder relative a ciascun concern sono identificati come cluster di concetti collegati ad altri concetti. Noi consideriamo ciascun cluster come una base razionale per il relativo concern. I concetti trovati nelle basi razionali popolano l\u27universo del discorso specifico per ogni stakeholder e compongono il vocabolario degli stakeholder. Alcuni concetti sono condivisi con altri stakeholder, mentre altri sono specifici di uno stakehoder; alcuni concetti sono specifici dei CT, mentre altri sono concetti medici o generali. In questo modo un\u27ontologia orientata ai concern per i CT puo\u27 essere creata. Il metodo e\u27 illustrato utilizzando i criteri di selezione dei soggetti, una componente di un progetto di CT, ma puo\u27 essere usato per ogni altra componente del protocollo del CT. La tassonomia del vocabolario dei concetti dei CT e la rete delle relative basi razionali ci fornisce una struttura possibile per lo sviluppo del software specialmente se si adotta una soluzione basata su architetture orientate ai servizi