Status Quo der Vermarktung ökologischer Ziegenmilchprodukte: Sicherung von mikrobiologischer Qualität und Authentizität am Modell der Region Hessen

Für eine Status-Quo-Erhebung am Modell der Region Hessen wurden ökologisch bzw. zu Vergleichszwecken konventionell erzeugte Ziegenmilchprodukte (Ziegenkäse) aus Direktvermarktung und Handel auf mikrobiologische Qualität und tierartspezifische Authentizität untersucht. Die mikrobiologischen Untersuchungen von 183 Proben zeigen, dass Ziegenkäse aus regionaler Direktvermarktung in Hessen hinsichtlich Gesundheitsrisiken durch pathogene Keime kein über dem für vergleichbare Produkte liegendes Problem darstellt. Für Ziegenkäse aus einigen Betrieben wurden aber deutliche Hygienemängel festgestellt, in Produkten zweier Betriebe (davon ein ökologisch wirtschaftender Direktvermarkter) mit den stärksten Hygienemängeln wurden zudem Listeria monocytogenes nachgewiesen. Die molekularbiologische Untersuchung von 160 als reine Ziegenmilchprodukte deklarierten Proben mittels PCR ergab, dass - mit Ausnahme der Produkte eines auffälligen Betriebes - ökologischen Produkte aus regionaler Direktvermarktung keine Kuhmilchzusätze enthielten. Bei Importprodukten war der Anteil positiver Proben je nach Ursprungsland sehr unterschiedlich. Insgesamt ergab sich für die untersuchten Parameter somit ein überwiegend positives Gesamtbild, die Produkte einzelner Betriebe mussten jedoch als problematisch angesehen werden. Aufgrund der Befunde erscheint es sinnvoll, zur Sicherstellung einer durchgehend guten Qualität und der gesundheitlichen Unbedenklichkeit in einigen Bereichen, insbesondere im Hinblick auf mikrobiologische Hygienemarker, verstärkt Routineuntersuchungen durchzuführen

Sambandet mellan våld mot husdjur och våld i nära relationer

Forskning har visat att det finns ett samband mellan våld i nära relationer och våld mot husdjur. I studier där man haft kontakt med utsatta kvinnor sågs att ca 2/3 av dessa har nämnt att även ett husdjur har varit utsatt av dennes partner. Våldet mot husdjuren i hemmet är ett sätt för förövaren att utöva makt och sätter den utsatta i en position där man inte vågar lämna hemmet, eller återvänder när man lyckats lämna. Veterinärerna är en av de yrkesgrupper som i sina roller träffar på utsatta djur samt människor. Det är därför av mycket stor vikt att veterinärer och annan djurhälsopersonal har kunskap kring sambandet och hur man hanterar ett sådant fall både i form av social kompetens, kun-skaper kring diagnostisering och dokumentation av NAI (Non-Accidental-Injuries), samt vilka myndigheter som ska kontaktas för vidare hantering. För att ta reda på vilka kun-skaper Sveriges veterinärer hade om våld mot djur och sambandet med våld i nära relat-ioner skickades en webenkät ut via Sveriges Veterinärförbund (SVF). Enkäten bestod av 19 slutna frågor, där möjligheten till egna reflektioner fanns i öppna kommentarsfält un-der respektive fråga. Enkäten togs fram i enlighet med vedertagen litteraturmetodik för att säkerställa att den höll hög validitet och reliabilitet. Enkäten skickades ut till SVF:s alla medlemmar, 2627 av landets 5378 legitimerade veterinärer (2019), och besvarades av 396 respondenter, vilket utgjorde en svarsfrekvens på 15%. Resultaten visade att medve-tenheten kring sambandet var generellt hög bland respondenterna. Däremot fanns det brister i kunskaper vad gäller identifiering, diagnostisering samt dokumentering av NAI, vilka myndigheter som skall kontaktas samt hur man ska förhålla sig i en situation på kliniken där man misstänker våld i nära relationer. Resultaten visade också att större an-delen respondenter ansåg att de inte fått utbildning kring detta ämne under sin veterinär-utbildning och att det inte heller finns information/utbildning tillgänglig på deras arbets-platser. Vidare visade resultaten att bristen på handlingsplaner/riktlinjer på arbetsplatserna är höga, vilket i sin tur tillsammans med bristande kunskaper kring sambandet, och NAI, leder till att många veterinärer inte anser sig kunna avgöra vad som skulle kunna vara ett fall av våld mot husdjur och/eller människa. Detta leder till att mörkertalet kring hur många fall som kommer in till veterinärer kan vara stort. För att stärka veterinärernas roller i dessa situationer krävs att mer resurser läggs på ytterligare utbildning under veteri-närutbildningen samt att fler kliniker använder sig av det materialet som tagits fram i ämnet för att möjliggöra kompetensutveckling och utbyta kunskap på och mellan arbets-platser. Det finns bland annat framtaget kunskapsmaterial och en handlingsplan för klini-ker, och kliniker kan beställa utbildning hos organisationen Se sambandet. Vidare skulle det också vara av stort intresse att mobilisera alla instanser som på något sätt är delaktiga i dessa processer, såsom polis, länsstyrelse, kvinnojourer, med flera för att tydliggöra an-svarsområden samt förbättra samarbetet mellan dem.Research has shown that there is a link between domestic violence and animal abuse. Studies involving contact with battered women has shown that 2/3 of them mentioned that their pets have also been abused by the perpetrator. Animal abuse in the closed quarters of the home is a way for perpetrators to exert power and will in most cases put the victim in a position where they are afraid to leave the home, or feel obligated to come back home after leaving, for fear of the wellbeing of the pet. Veterinarians are one of the professions that might encounter abused pets and owners in their professional roles. It is therefore of utmost importance that they and other animal health staff have a good knowledge regarding social competence, diagnostication and documentation of NAI (Non-Accidental-Injuries), and which authorities to contact for further investigations and reporting. A web survey was sent out to the Swedish veterinarians through the Swedish Veterinary Association (SVF) to assess their knowledge about NAI and the link. The web survey consisted of 19 closed questions with a possibility to write personal reflections in a comment box below each question. The survey was created with the help of literature methodology to ensure a high reliability and validity. The survey was sent to the members of SVF, 2627 out of 5378 legitimized veterinarians in the country (2019) and was answered by 396 respondents. This made a response rate of 15%. The results showed that the awareness regarding the link was generally high among the respondents. However, there was a lack of knowledge regarding the identification, diagnostication and documentation of NAI, which authorities to contact and how one should handle situations where you might suspect clients to be victims of domestic violence. The results also showed that most of the respondents felt they did not have enough education on the matter, through the veterinary program nor that there is available information or education at their current working place. Furthermore, the results also showed the lack of guidelines and action plans available at their workplaces, which in combination with low knowledge of the link and NAI, could result in veterinarians not feeling competent enough to assess if they encounter a case of abuse or not. This in turn means that we do not know the full extent of unrecorded cases of animal abuse. To reinforce veterinarians meeting NAI in their professional roles, more resources need to be used to ensure more education in the veterinary program as well as more possibilities for competence development and information exchange within and between workplaces. The organization “Se Sambandet” has material that can be used for educational purposes, as well as action plans that can be used in the clinics. It would also be of big interest to mobilize all departments such as police, county government, womens shelters, and others that are in some way involved in the processes, in order to clarify areas of responsibility and improve the cooperation between them

Exploring Swedish veterinarians' awareness of non-accidental-injuries, animal abuse and the Link to domestic violence, and their role in addressing this societal issue

Research has established a link between animal abuse and domestic violence (the Link), where the perpetrator uses the animal to control the human victim. Veterinarians are exposed to both vulnerable animals and humans, playing a crucial role in detecting and handling these cases. A study using an online survey was conducted in 2019, exploring the awareness of Swedish veterinarians regarding Non-accidental-injuries (NAI) in animals, the Link between animal abuse and domestic violence and how to handle such cases. The survey was distributed by the Swedish Veterinary Association to 2,627 licensed veterinarians and was answered by 362 respondents. One of ten had experienced the Link in their clinical work while 63% did not know if they had. The awareness of the Link was generally high (90%), whereas 68% of respondents answered that they did not know or were unsure about the concept of NAI. Almost half of the respondents (44%) felt that they were unsure about how NAI should be diagnosed, 56% did not know how NAI should be documented and a third (34%) did not know which authority should be contacted in case of suspicion of animal abuse. A minority, 17%, knew how to act when there was a reason to suspect domestic violence. The responses showed that support in the clinics is inadequate, with only 10% stating that information material and further education is offered about the Link and 17% knew of action plans or procedures for dealing with a suspected case of animal abuse. Only 16% stated that the Link was part of their education. Improving the ability of veterinarians to act appropriately requires more integrated theoretical and practical training during their university studies. At the clinic, further education, action plans and collaboration with competent authorities and organizations are crucial. It is important that resources, such as information material, guidelines, action plans and educational programs are identified and used to support veterinarians in their work to help vulnerable animals and, by extension, people, in line with the concept of One Welfare

High-throughput planar solid phase extraction : a new clean-up concept in multi-residue analysis of pesticides

Currently, the most serious problems in pesticide residue analysis by liquid chromatography (LC) or gas chromatography (GC) coupled to mass spectrometry (MS) concern the so-called matrix effects. The most common way to avoid these effects is the application of matrix-matched calibration standards. Nevertheless, an efficient clean-up undoubtedly is the best way to prevent matrix effects in multi-residue analysis of pesticides in food by LCMS or GCMS. For a totally new powerful clean-up method, called high-throughput planar solid phase extraction (HTpSPE), highly automated planar chromatographic tools were applied to remove co-extracted matrix substances entirely and to eliminate any kind of matrix related effects. For sample extraction, the quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe (QuEChERS) method was used to initially collect pesticides from fruits and vegetables. The received acetonitrile extracts were applied directly for the development of the novel HTpSPE clean-up. Thin-layer chromatography (TLC) was used to completely separate pesticides from matrix compounds and to focus them into a sharp zone. A two-fold development on amino-modified silica gel thin-layers with acetonitrile for the first development, and acetone for the second development in the backwards direction, was evaluated to perform the best clean-up result and collect the pesticides in a sharp, single target zone. To easily locate the pesticide zone, the Sudan II dye was added to the extracts. Following this clean-up, the target zones (pesticides) were eluted by the TLCMS interface into vials for the LCMS determination. HTpSPE resulted in extracts which were nearly free of co-extracted matrix and matrix effects, as shown for seven chemically representative pesticides (acetamiprid, azoxystrobin, chlorpyrifos, fenarimol, mepanipyrim, penconazole, and pirimicarb) in four different fruit and vegetable matrices (apples, cucumbers, red grapes, and tomatoes). Thanks to the very clean HTpSPE extracts, calibration can simply be performed with pure solvent standards and the quantitation by LCMS provided excellent mean recoveries and relative standard deviations. In addition, tea samples as rather challenging matrices were chosen to apply for HTpSPE. The matrix load of tea extracts generally was too high for the available thin-layer capacity and the selectivity of the amino-modified phase was not suitable for the separation of caffeine and further matrix compounds from the target analytes (pesticides). By modifying the sample extraction, adding a pre-cleaning by dispersive solid phase extraction (dSPE) and changing the thin-layer phase to normal phase silica gel, the complete separation of pesticides and tea matrix components was possible, when again a two-fold development was applied. Caffeine and other alkaloids were completely removed. The effectiveness of HTpSPE was demonstrated by LCMS/MS calibration curves from matrix-matched and solvent standards, which were nearly identical and by very good mean recoveries, calculated against pure solvent standards. Concerning all validation parameters, the new acetonitrile-HTpSPE procedure for tea samples was superior to the QuEChERS-dSPE method and offered highly successful results. In recent years, large-scale screening in pesticide residue analysis has gained more and more importance. Keeping this in mind, a screening strategy for HTpSPE extracts, using a high-resolution MS, was developed to analyze the cleaned extracts directly for pesticide residues without a liquid chromatographic separation. By this hyphenation, a completely new microliter-flow injection analysistime-of-flight mass spectrometry (µL-FIATOFMS) screening was introduced. The novel HTpSPEµL-FIATOFMS approach enabled the detection of all pesticides simultaneously in a single mass spectrum within a few minutes. The obtained mass spectra were nearly free of matrix compounds, which is especially the great benefit of the effective HTpSPE clean-up. Recovery studies by HTpSPEµL-FIATOFMS against solvent standards for the matrices and pesticides under study provided excellent results, using the mass signal intensities under the entire FIA sample peak. HTpSPE clearly showed superior results concerning every tested parameter than dSPE. With the help of a self-constructed mass database searching tool, all spiked pesticides were detected and correctly identified, while only very low numbers of false-positive findings occurred. Furthermore, a non-target screening approach was successfully implemented by slightly changing the database searching process, offering a mass list of all substances, which are present in the injected extracts but not included in the mass database. Finally, the new HTpSPEµL-FIATOFMS screening was successfully applied to several real samples, when the identified pesticides were quite identical compared to results of LCMS/MS analysis of the QuEChERS-dSPE extracts.In der Rückstandsanalytik von Pestiziden bereiten Matrixeffekte bei der flüssigkeits- oder gaschromatographischen Bestimmung mittels Massenspektrometrie (LCMS oder GCMS) die größten Probleme. Standardmäßig versucht man, diese durch Verwendung von matrix-matched Kalibrierstandards zu kompensieren. Trotzdem ist eine effiziente Reinigung der Extrakte zweifelsohne der beste Weg, um diese Effekte in der Pestizidrückstandsanalytik in Lebensmitteln mittels LCMS oder GCMS zu vermeiden. Für die Einführung einer völlig neuen, leistungsfähigen Clean-up Methode, der so genannten high-throughput planar solid phase extraction (HTpSPE), wurden hoch automatisierte planar-chromatographische Werkzeuge eingesetzt, um die mitextrahierte Matrix zu entfernen und matrixbedingten Effekten zu beseitigen. Die Probenextraktion erfolgte gemäß der QuEChERS-Methode. Die Acetonitril-Extrakte wurden direkt für die Entwicklung der neuen HTpSPE Reinigung verwendet. Dieses nutzt die Dünnschicht-Chromatographie (DC), um Pestizide und Matrix vollständig voneinander zu trennen und die Wirkstoffe in einer scharfen Zone zu sammeln. Das beste Clean-up Ergebnis ergab eine 2-fache Entwicklung auf Amino-modifizierten DC-Schichten. Die erste Entwicklung erfolgte mit Acetonitril, die zweite Entwicklung mit Aceton in der Rückwärtsrichtung. Vor der HTpSPE wurde den Extrakten der Farbstoff Sudan II als visueller Marker hinzugefügt, wodurch die Pestizidzone einfach zu erkennen ist. Nach diesem Clean-up wurden die Zielzonen mittels des TLCMS Interface in Gläschen eluiert und mittels LCMS analysiert. Nach dem HTpSPE Clean-up waren die Extrakte nahezu frei von mitextrahierter Matrix und Matrixeffekte. Dies wurde erfolgreich anhand von sieben chemisch repräsentativen Pestiziden (Acetamiprid, Azoxystrobin, Chlorpyrifos, Fenarimol, Mepanipyrim, Penconazol und Pirimicarb) in vier Obst- und Gemüsematrices (Äpfel, Gurken, roten Trauben und Tomaten) gezeigt. Dank der sehr sauberen HTpSPE-Extrakte kann die Quantifizierung einfach mit reinen Lösungsmittelstandards erfolgen. LCMS Messungen lieferten exzellente mittlere Wiederfindungen und relative Standardabweichungen. Für eine weitere Anwendung wurden Teeproben als äußerst anspruchsvolle Matrices ausgewählt. Die Matrixfracht der Extrakte war für die Kapazität der DC-Schichten zu hoch und die Selektivität der Aminophase war nicht geeignet, um Koffein und weitere Matrixverbindungen von den Zielsubstanzen (Pestiziden) abzutrennen. Durch die Modifizierung der Extraktion, einer Vorreinigung mittels dispersiver Festphasenextraktion (dSPE) und dem Wechsel der DC-Phase zu unmodifiziertem Kieselgel konnte die vollständige Abtrennung der Matrix von den Pestiziden erreicht werden, wieder in Kombination mit einer 2-fachen Entwicklung. Koffein und andere Alkaloide wurden vollständig entfernt. LCMS/MS Kalibriergeraden von matrix-matched und Lösemittelstandards und sehr gute mittlere Wiederfindungen, bestimmt gegen Lösemittelstandards, belegten erneut die Leistungsfähigkeit der HTpSPE. Das neue Acetonitril-HTpSPE Verfahren ergab hinsichtlich aller Validierungsparameter zuverlässigere und exaktere Resultate als die QuEChERS-dSPE Methode. In den letzten Jahren ist die allumfassende Analytik mittels Screening-Methoden in der Rückstandsanalytik von Pestiziden immer wichtiger geworden. Vor diesem Hintergrund wurde ein Screening-Konzept für HTpSPE-Extrakte entwickelt, das ein hochauflösendes MS nutzt, um die gereinigten Extrakte auf Pestizidrückstände zu untersuchen, ohne dass eine chromatographische Trennung notwendig ist. Diese Kopplung lieferte eine völlig neue Strategie für ein schnelles Screening, die direkte Mikroliter-Fließinjektionsanalyse mittels Flugzeitmassenspektrometrie (µL-FIATOFMS). Der neue HTpSPEµL-FIATOFMS Ansatz ermöglichte die simultane Erfassung aller Pestizide in einem einzigen Massenspektrum innerhalb von wenigen Minuten. Dank der HTpSPE waren die erhaltenen Spektren nahezu frei von Matrixverbindungen. Unter Verwendung der Intensitäten der Massensignale lieferte das HTpSPEµL-FIATOFMS Verfahren sehr gute mittlere Wiederfindungen gegen Lösemittelstandards für alle Matrices und Pestizide die Gegenstand dieser Studie waren. Im Vergleich zur dSPE zeigte die HTpSPE deutlich bessere Ergebnisse für alle getesteten Parameter. Mithilfe einer eigenen, neu entwickelten Datenbank-basierten Suchstrategie wurden alle dotierten Pestizide erkannt und korrekt identifiziert, während nahezu keine falsch-positiven Treffer auftraten. Zusätzlich wurde eine non-target Suchoption erfolgreich etabliert. Sie lieferte eine Liste an exakten Massen aller Probenbestandteile, die in den injizierten Extrakten vorhanden, aber nicht Bestandteil der Datenbank sind. Das neue HTpSPEµL-FIATOFMS Screening wurde schließlich erfolgreich auf diverse reale Proben angewandt. Die identifizierten Pestizide entsprachen denjenigen, die zuvor in einem Handelslabor mittels LCMS/MS Messungen von QuEChERS-dSPE Extrakten detektiert wurden

Genetiska parametrar som påverkar pälsegenskaper hos domesticerade djurarter

Syftet med denna litteraturstudie var att med hjälp av relevant litteratur ta reda på vilka genetiska parametrar och specifika gener som kan påverka pälsegenskaper och jämföra mellan olika djurslag från olika produktionslinjer. De genetiska parametrarna som undersöktes var arvbarheter och genetiska korrelationer. Utöver detta var det också intressant att se hur pälsegenskaper värderas i en produktion, genom att jämföra deras ekonomiska vikter. Resultaten visade att beräkning av arvbarheter och genetiska korrelationer används i många olika produktionsgrenar såsom får, räv och nötkreatur. I avelsarbetet läggs mycket vikt på att försöka eliminera så mycket miljöpåverkan som möjligt. Samtidigt arbetas det mycket med att utforska vad det finns för korrelationer mellan gener som kan påverka en egenskap, både positivt och negativt. Arvbarheterna som jämfördes mellan studierna var medelhöga till höga och genetiska korrelationer kunde ses både mellan pälsegenskaperna samt mellan pälsegenskaperna och andra viktiga egenskaper, exempelvis mjölkmängd. De ekonomiska vikterna för pälsegenskaperna var relativt lika mellan djurslag, där man i det flesta fall lade mer vikt på fertilitet och överlevnad av ungar oavsett vilken produktionslinje det handlade om. Genom forskning med olika hundraser med olika fenotyper har man hittat fem muterade gener som påverkar olika pälsegenskaper; FOXI3, SGK3, RSPO2, FGF5 och KRT71. Intresset och kunskaperna kring de genetiska parametrarna som kan påverka päls-egenskaper har ökat. Avelsarbetet har blivit mer framgångsrikt och det är viktigt att vi i framtiden fortsätter den utveckling som sker för att öka avelsframsteget ytterligare.The purpose of this review was to use relevant literature to study which genetic pa-rameters and specific genes that could affect fur traits and to compare these between different animal breeds and productions. The genetic parameters that were studied were heritabilities and genetic correlations. It was also interesting to study how dif-ferent fur traits were valued in a production, by comparing their economic values. The results showed that calculations of heritabilites and genetic correlations are widely used in different productions, for example, fox, mink and cattle. When using breeding programmes, very much effort is used to try to eliminate as much of the environmental impacts as possible. There is also much work done trying to study what kinds of genetic correlations there might be between genes that affect certain traits, both in a positive and negative way. The heritabilities that were compared were moderate to high and genetic correlat-ions were seen both between fur traits, but also between fur traits and other important production traits, such as milk yield. The economic values for fur traits were relatively equal between animal breeds, and in most cases it was seen that the most economically important traits were fertility and the survival of offspring. Through research of different dog breeds with different phenotypes, five mutated genes were found that could affect different fur traits; FOXI3, SGK3, RSPO2, FGF5 och KRT71. The knowledge and interest of genetic parameters that can affect fur traits has increased and the breeding programmes have gotten more successful. It is important that we in the future continue the development of this knowledge in order to increase the breeding progress even further

Asparaginase treatment to mitigate acrylamide formation in wheat and rye cookies

The Maillard reaction between asparagine and a carbonyl source can lead to acrylamide formation, which is classified as "probably carcinogenic to humans". This study aimed to investigate the impact of varying amounts, incubation times, and temperatures of asparaginases on reducing acrylamide in wheat and rye cookies while preserving sensory attributes. To determine if different asparaginases reduce acrylamide without negative effects on cookie quality, acrylamide was quantified using ELISA, and color, texture and sensory attributes were assessed. Adding asparaginases resulted in a reduction of acrylamide by up to 85%. Incubating cookie dough for 10 or 30 min at 60 ◦C or 90 ◦C did not impact acrylamide formation. Acrylamide concentrations were higher by an average of 78 μg/kg for an incubation temperature of 90 ◦C compared to 60 ◦ C. Rye cookies exhibited higher acrylamide concentrations by 490 μg/kg compared to wheat due to higher free asparagine in rye flour. Aspar- aginases showed minimal effects on cookie color and texture, with no changes in sensory evaluation. Acrylamide can be reduced using asparaginases, providing a simple and effective means of ensuring safe food for consumers

German-Austrian guideline on screening for anal dysplasia and anal carcinoma in people living with HIV.

People with HIV are up to 100 times more likely to develop anal carcinoma compared to the general population. Diagnosing and treating precursor lesions, specifically high-grade anal dysplasia, can significantly reduce the risk of developing anal carcinoma. This S2k-guideline outlines the factors that increase the likelihood of developing anal carcinoma and its precursors, including advancing age, a low CD4+ T-lymphocyte nadir, active cigarette smoking, receptive anal intercourse, or persistent infection with high-risk (HR) types of human papillomavirus (HPV). Screening is primarily recommended for all men who have sex with men (MSM) and transgender women with HIV starting at age 35, and all people with HIV starting at age 45. After inspection and digital anorectal examination, anal cytology is collected. An HR-HPV test may be performed. If clinical abnormalities are present or if cytology shows "ASC-US or worse", a referral for high-resolution anoscopy (HRA) is indicated. If lesions are found during HRA, a biopsy should be obtained. Anal intraepithelial neoplasia (AIN) grade-III or AIN-II p16-positive correspond to high-grade dysplasia and require treatment. The most strongly recommended therapeutic options are electrocautery, 85% trichloroacetic acid, and surgical excision. Finally, the guideline discusses how these screening recommendations can be applied to individuals without HIV

High-throughput planar solid phase extraction : ein neues Clean-up Konzept in der Multirückstandsanalytik von Pestiziden

Currently, the most serious problems in pesticide residue analysis by liquid chromatography (LC) or gas chromatography (GC) coupled to mass spectrometry (MS) concern the so-called “matrix effects”. The most common way to avoid these effects is the application of matrix-matched calibration standards. Nevertheless, an efficient clean-up undoubtedly is the best way to prevent matrix effects in multi-residue analysis of pesticides in food by LC–MS or GC–MS. For a totally new powerful clean-up method, called high-throughput planar solid phase extraction (HTpSPE), highly automated planar chromatographic tools were applied to remove co-extracted matrix substances entirely and to eliminate any kind of matrix related effects. For sample extraction, the quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe (QuEChERS) method was used to initially collect pesticides from fruits and vegetables. The received acetonitrile extracts were applied directly for the development of the novel HTpSPE clean-up. Thin-layer chromatography (TLC) was used to completely separate pesticides from matrix compounds and to focus them into a sharp zone. A two-fold development on amino-modified silica gel thin-layers with acetonitrile for the first development, and acetone for the second development in the backwards direction, was evaluated to perform the best clean-up result and collect the pesticides in a sharp, single target zone. To easily locate the pesticide zone, the Sudan II dye was added to the extracts. Following this clean-up, the target zones (pesticides) were eluted by the TLC–MS interface into vials for the LC–MS determination. HTpSPE resulted in extracts which were nearly free of co-extracted matrix and matrix effects, as shown for seven chemically representative pesticides (acetamiprid, azoxystrobin, chlorpyrifos, fenarimol, mepanipyrim, penconazole, and pirimicarb) in four different fruit and vegetable matrices (apples, cucumbers, red grapes, and tomatoes). Thanks to the very clean HTpSPE extracts, calibration can simply be performed with pure solvent standards and the quantitation by LC–MS provided excellent mean recoveries and relative standard deviations. In addition, tea samples as rather challenging matrices were chosen to apply for HTpSPE. The matrix load of tea extracts generally was too high for the available thin-layer capacity and the selectivity of the amino-modified phase was not suitable for the separation of caffeine and further matrix compounds from the target analytes (pesticides). By modifying the sample extraction, adding a pre-cleaning by dispersive solid phase extraction (dSPE) and changing the thin-layer phase to normal phase silica gel, the complete separation of pesticides and tea matrix components was possible, when again a two-fold development was applied. Caffeine and other alkaloids were completely removed. The effectiveness of HTpSPE was demonstrated by LC–MS/MS calibration curves from matrix-matched and solvent standards, which were nearly identical and by very good mean recoveries, calculated against pure solvent standards. Concerning all validation parameters, the new acetonitrile-HTpSPE procedure for tea samples was superior to the QuEChERS-dSPE method and offered highly successful results. In recent years, large-scale screening in pesticide residue analysis has gained more and more importance. Keeping this in mind, a screening strategy for HTpSPE extracts, using a high-resolution MS, was developed to analyze the cleaned extracts directly for pesticide residues without a liquid chromatographic separation. By this hyphenation, a completely new microliter-flow injection analysis–time-of-flight mass spectrometry (µL-FIA–TOFMS) screening was introduced. The novel HTpSPE–µL-FIA–TOFMS approach enabled the detection of all pesticides simultaneously in a single mass spectrum within a few minutes. The obtained mass spectra were nearly free of matrix compounds, which is especially the great benefit of the effective HTpSPE clean-up. Recovery studies by HTpSPE–µL-FIA–TOFMS against solvent standards for the matrices and pesticides under study provided excellent results, using the mass signal intensities under the entire FIA sample peak. HTpSPE clearly showed superior results concerning every tested parameter than dSPE. With the help of a self-constructed mass database searching tool, all spiked pesticides were detected and correctly identified, while only very low numbers of false-positive findings occurred. Furthermore, a non-target screening approach was successfully implemented by slightly changing the database searching process, offering a mass list of all substances, which are present in the injected extracts but not included in the mass database. Finally, the new HTpSPE–µL-FIA–TOFMS screening was successfully applied to several real samples, when the identified pesticides were quite identical compared to results of LC–MS/MS analysis of the QuEChERS-dSPE extracts.In der Rückstandsanalytik von Pestiziden bereiten „Matrixeffekte“ bei der flüssigkeits- oder gaschromatographischen Bestimmung mittels Massenspektrometrie (LC–MS oder GC–MS) die größten Probleme. Standardmäßig versucht man, diese durch Verwendung von matrix-matched Kalibrierstandards zu kompensieren. Trotzdem ist eine effiziente Reinigung der Extrakte zweifelsohne der beste Weg, um diese Effekte in der Pestizidrückstandsanalytik in Lebensmitteln mittels LC–MS oder GC–MS zu vermeiden. Für die Einführung einer völlig neuen, leistungsfähigen Clean-up Methode, der so genannten high-throughput planar solid phase extraction (HTpSPE), wurden hoch automatisierte planar-chromatographische Werkzeuge eingesetzt, um die mitextrahierte Matrix zu entfernen und matrixbedingten Effekten zu beseitigen. Die Probenextraktion erfolgte gemäß der QuEChERS-Methode. Die Acetonitril-Extrakte wurden direkt für die Entwicklung der neuen HTpSPE Reinigung verwendet. Dieses nutzt die Dünnschicht-Chromatographie (DC), um Pestizide und Matrix vollständig voneinander zu trennen und die Wirkstoffe in einer scharfen Zone zu sammeln. Das beste Clean-up Ergebnis ergab eine 2-fache Entwicklung auf Amino-modifizierten DC-Schichten. Die erste Entwicklung erfolgte mit Acetonitril, die zweite Entwicklung mit Aceton in der Rückwärtsrichtung. Vor der HTpSPE wurde den Extrakten der Farbstoff Sudan II als visueller Marker hinzugefügt, wodurch die Pestizidzone einfach zu erkennen ist. Nach diesem Clean-up wurden die Zielzonen mittels des TLC–MS Interface in Gläschen eluiert und mittels LC–MS analysiert. Nach dem HTpSPE Clean-up waren die Extrakte nahezu frei von mitextrahierter Matrix und Matrixeffekte. Dies wurde erfolgreich anhand von sieben chemisch repräsentativen Pestiziden (Acetamiprid, Azoxystrobin, Chlorpyrifos, Fenarimol, Mepanipyrim, Penconazol und Pirimicarb) in vier Obst- und Gemüsematrices (Äpfel, Gurken, roten Trauben und Tomaten) gezeigt. Dank der sehr sauberen HTpSPE-Extrakte kann die Quantifizierung einfach mit reinen Lösungsmittelstandards erfolgen. LC–MS Messungen lieferten exzellente mittlere Wiederfindungen und relative Standardabweichungen. Für eine weitere Anwendung wurden Teeproben als äußerst anspruchsvolle Matrices ausgewählt. Die Matrixfracht der Extrakte war für die Kapazität der DC-Schichten zu hoch und die Selektivität der Aminophase war nicht geeignet, um Koffein und weitere Matrixverbindungen von den Zielsubstanzen (Pestiziden) abzutrennen. Durch die Modifizierung der Extraktion, einer Vorreinigung mittels dispersiver Festphasenextraktion (dSPE) und dem Wechsel der DC-Phase zu unmodifiziertem Kieselgel konnte die vollständige Abtrennung der Matrix von den Pestiziden erreicht werden, wieder in Kombination mit einer 2-fachen Entwicklung. Koffein und andere Alkaloide wurden vollständig entfernt. LC–MS/MS Kalibriergeraden von matrix-matched und Lösemittelstandards und sehr gute mittlere Wiederfindungen, bestimmt gegen Lösemittelstandards, belegten erneut die Leistungsfähigkeit der HTpSPE. Das neue Acetonitril-HTpSPE Verfahren ergab hinsichtlich aller Validierungsparameter zuverlässigere und exaktere Resultate als die QuEChERS-dSPE Methode. In den letzten Jahren ist die allumfassende Analytik mittels Screening-Methoden in der Rückstandsanalytik von Pestiziden immer wichtiger geworden. Vor diesem Hintergrund wurde ein Screening-Konzept für HTpSPE-Extrakte entwickelt, das ein hochauflösendes MS nutzt, um die gereinigten Extrakte auf Pestizidrückstände zu untersuchen, ohne dass eine chromatographische Trennung notwendig ist. Diese Kopplung lieferte eine völlig neue Strategie für ein schnelles Screening, die direkte Mikroliter-Fließinjektionsanalyse mittels Flugzeitmassenspektrometrie (µL-FIA–TOFMS). Der neue HTpSPE–µL-FIA–TOFMS Ansatz ermöglichte die simultane Erfassung aller Pestizide in einem einzigen Massenspektrum innerhalb von wenigen Minuten. Dank der HTpSPE waren die erhaltenen Spektren nahezu frei von Matrixverbindungen. Unter Verwendung der Intensitäten der Massensignale lieferte das HTpSPE–µL-FIA–TOFMS Verfahren sehr gute mittlere Wiederfindungen gegen Lösemittelstandards für alle Matrices und Pestizide die Gegenstand dieser Studie waren. Im Vergleich zur dSPE zeigte die HTpSPE deutlich bessere Ergebnisse für alle getesteten Parameter. Mithilfe einer eigenen, neu entwickelten Datenbank-basierten Suchstrategie wurden alle dotierten Pestizide erkannt und korrekt identifiziert, während nahezu keine falsch-positiven Treffer auftraten. Zusätzlich wurde eine non-target Suchoption erfolgreich etabliert. Sie lieferte eine Liste an exakten Massen aller Probenbestandteile, die in den injizierten Extrakten vorhanden, aber nicht Bestandteil der Datenbank sind. Das neue HTpSPE–µL-FIA–TOFMS Screening wurde schließlich erfolgreich auf diverse reale Proben angewandt. Die identifizierten Pestizide entsprachen denjenigen, die zuvor in einem Handelslabor mittels LC–MS/MS Messungen von QuEChERS-dSPE Extrakten detektiert wurden

Untersuchungen zur mikrobiologischen Beschaffenheit von Ziegenkäse verschiedener Herstellungs- und Vermarktungsweisen

In der vorliegenden Arbeit wurden 183 Ziegenkäse (44 Frischkäse, 56 Weichkäse, 83 Schnitt- und Hartkäse) im Zeitraum vom Mai 2002 bis September 2003 auf wichtige mikrobiologische Parameter - Hygienekeime (S. aureus, E. coli, coliforme Keime) und pathogene Keime (B. cereus, L. monocytogenes, Salmonellen) sowie auf verschiedene Toxine (Staphylokokken-Enterotoxine, Verotoxine) - untersucht. Ein Schwerpunkt der Untersuchung lag bei Erzeugnissen aus regionaler hessischer Produktion. S. aureus wurde im Vergleich zu ähnlichen Untersuchungen an Kuhmilch nur selten (1 Weichkäse, 1 Schnittkäse) nachgewiesen. Lediglich ein Schnittkäse wies hohe Werte auf (8,6 x 105 S. aureus/g). Hinweise auf S. aureus-Enterotoxine ergaben sich nicht. Im Hinblick auf die Belastung mit E. coli und coliformen Keimen ergab sich nur für Frischkäse eine geringe Vorkommenshäufigkeit. Hingegen wies ein großer Prozentsatz der Weichkäse hohe Keimzahlen an E. coli und coliformen Keimen auf. So überschritten Coliforme Werte von 104 KbE/g in 25 Proben (45 %), in 19 Proben (34 %) einen Wert von 105 KbE/g. Maximalwerte lagen bei 108 KbE/g, dabei waren vor allem Rohmilchkäse betroffen. Die Befunde für E. coli lagen etwas niedriger, aber auch hier wurden recht häufig hohe Kontaminationen nachgewiesen. Die Belastung war unabhängig von ökologischer oder konventioneller Herstellung und wurde gleichermaßen für regionale Produkte als auch für Importprodukte festgestellt. In Schnittkäse wurden in 15 Proben (18 %) Werte über 104 KbE/g im Hinblick auf E. coli und Coliforme fest¬gestellt. Im Hinblick auf regional hergestellte Produkte war auffällig, dass zwei Betriebe (davon ein konventionell wirtschaftender und ein ökologisch wirtschaftender mit Direktvermarktung) in deren Produkten auch L. monocytogenes nachgewiesen worden war die stärksten Hygienemängel aufwiesen. Bacillus cereus wurde insgesamt in 25 Proben (14 %) in Keimzahlen von 101 bis maximal 2,7 x 102 KbE/g nachgewiesen. L. monocytogenes wurde ausschließlich in Schnittkäsen nachgewiesen. Vier der untersuchten 83 Schnitt- und Hartkäse-Proben waren positiv, wobei ein deutlicher Zusammenhang zwischen dem Auftreten von L. monocytogenes und schweren hygienischen Mängeln festzustellen war. Salmonellen sowie Verotoxine wurden in keiner Probe nachgewiesen. Die Ergebnisse der Untersuchung ergaben keine Hinweise auf Unterschiede hinsichtlich der mikrobiologischen Beschaffenheit von Ziegenkäse zwischen Produkten aus Direktvermarktung und solchen aus dem Einzelhandel sowie zwischen ökologisch und konventionell hergestellten Käsen. Deutliche Hygienemängel wurden hingegen generell bei Weichkäsen, teilweise auch bei Schnitt- und Hartkäsen festgestellt. Auch waren Käse aus Rohmilch deutlich stärker mit hygienerelevanten Keimen kontaminiert als Käse, die aus wärmebehandelter Milch hergestellt worden waren.In the present thesis, the microbiological quality of cheese made from goats milk was assessed between May 2002 and September 2003. A total of 183 different goat cheese samples (fresh cheese, n = 44; soft cheese, n = 56; semi-hard and hard cheese, n = 83) were analyzed for bacteria indicating general hygienic quality (S. aureus, E. coli, coliform bacteria), for pathogenic bacteria (B. cereus, L. monocytogenes, Salmonella), and for bacterial toxins (staphylococcal enterotoxins, verotoxins). One focus of the investigation was on the produce from regional production in the State of Hessen. In comparison with similar investigations in cow milk, higher numbers of S. aureus were identified rarely (1 soft cheese, 1 semi-hard cheese) in goats milk cheese. Additionally, there was no indication for the presence of S. aureus enterotoxins in these samples. With respect to contamination with E. coli and coliform bacteria, only fresh cheese showed a low incidence rate. In contrast, a large percentage of soft cheese samples had high numbers of E. coli and coliform bacteria. Numbers of coliform bacteria exceeded 104 CFU/g in 25 samples (45 %) and 105 CFU/g in 19 samples (34 %). Maximum values reached 108 CFU/g, mainly affecting raw milk cheese. Findings for E. coli were somewhat less pronounced, but still a relatively high number of contamination was recorded. The contamination was independent from production type (organic vs. conventional) and was similar for regional Hessian and imported produce. E. coli and coliform bacteria with > 104 CFU/g were detected in 15 samples (18 %) of sliced cheese. With regard to regional products it was important to note that two producers (one 'conventional producer' and one 'organic producer' with direct marketing) with products testing positive for L. monocytogenes showed the most pronounced hygiene deficiencies. Bacillus cereus was found in 25 samples (14 %) at low levels of contamination, ranging from 101 to 2,7 x 102 CFU/g. L. monocytogenes was detected in four samples of semi-hard cheese. There was a relationship between the occurrence of L. monocytogenes and severe hygiene deficiencies as indicated by high numbers of other microbiological parameters. Salmonella was not detected in any of the samples. No sample gave positive ELISA results for verotoxins 1 and 2 after selective enrichment. With regard to the microbiological quality of goat cheese, no differences between products from direct marketing and retail shops, or between organic and conventional production, respectively, were found. However, results obtained for bacteria considered as hygiene indicators showed that soft cheese, and to a lesser extent some semi-hard and hard cheese, were of poor microbiological quality. Raw milk cheese was contaminated to a higher degree with hygiene-relevant bacteria than cheese made from heat-treated milk