The pituitary TGFb1 system as a novel target for the treatment of resistant prolactinomas

Prolactinomas are the most frequently observed pituitary adenomas and most of themrespond well to conventional treatment with dopamine agonists (DAs). However, a subsetof prolactinomas fails to respond to such therapies and is considered as DA-resistantprolactinomas (DARPs). New therapeutic approaches are necessary for these tumors.Transforming growth factor b1 (TGFb1) is a known inhibitor of lactotroph cell proliferationand prolactin secretion, and it partly mediates dopamine inhibitory action. TGFb1 is secretedto the extracellular matrix as an inactive latent complex, and its bioavailability is tightlyregulated by different components of the TGFb1 system including latent binding proteins,local activators (thrombospondin-1, matrix metalloproteases, integrins, among others), andTGFb receptors. Pituitary TGFb1 activity and the expression of different components of theTGFb1 system are regulated by dopamine and estradiol. Prolactinomas (animal models andhumans) present reduced TGFb1 activity as well as reduced expression of several componentsof the TGFb1 system. Therefore, restoration of TGFb1 inhibitory activity represents a noveltherapeutic approach to bypass dopamine action in DARPs. The aim of this review is tosummarize the large literature supporting TGFb1 important role as a local modulator ofpituitary lactotroph function and to provide recent evidence of the restoration of TGFb1activity as an effective treatment in experimental prolactinomasFil: Recouvreux, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Cedars Sinai Medical Center; Estados UnidosFil: Camilletti, María Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rifkin, Daniel B.. University of New York; Estados UnidosFil: Diaz, Graciela Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Sex differences in the pituitary TGFβ1 system: the role of TGFβ1 in prolactinoma development

Prolactinomas are the most frequent functioning pituitary adenomas, and sex differences in tumor size, behavior and incidence have been described. These differences have been associated with earlier diagnosis in woman, as well as with serum estradiol levels. Experimental models of prolactinomas in rodents also show a higher incidence in females, and recent findings suggest that gender differences in the transforming growth factor beta 1 (TGFbeta1) system might be involved in the sex-specific development of prolactinomas in these models. The aim of this review is to summarize the literature supporting the important role of TGFbeta1 as a local modulator of pituitary lactotroph function and to provide recent evidencefor TGF1 involvement in the sex differences found in prolactinoma development in animal models.Fil: Recouvreux, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute; Estados UnidosFil: Faraoni, Erika Yanil. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Camilletti, María Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Ratner, Laura Daniela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Abeledo Machado, Alejandra Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rulli, Susana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Diaz, Graciela Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

O abandono afetivo de filho menor como fundamento da configuração de dano moral

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Jurídicas. Direito.O presente trabalho de conclusão de curso tem por objetivo analisar a possibilidade de imputar-se ao genitor condenação a título de danos morais em decorrência do abandono afetivo de sua prole. Nessa senda, o exame foi inicialmente centralizado no estudo da entidade familiar contemporânea, sua evolução e os princípios norteadores relevantes para o deslinde do trabalho. Em sequência, a pesquisa voltou-se para a caracterização da responsabilidade aquiliana conforme o ordenamento jurídico pátrio, focando na normatização do dano extrapatrimonial e sua aplicabilidade no âmbito das relações afetivas. Firmados esses alicerces, passou-se a explorar as nuances do abandono afetivo com o propósito de, ao final, comparar os argumentos lançados pela doutrina e pela jurisprudência contrários à responsabilização paterna pela conduta negligente com os fundamentos elaborados visando a configuração da obrigação de indenizar. Enfim, por intermédio dos fundamentos teóricos levantados, encerra-se com a conclusão de que, presentes os pressupostos essenciais da responsabilidade civil no caso concreto, a interpretação que culmina com a possibilidade de condenação dos pais em virtude do descumprimento dos deveres inerentes ao poder familiar a eles conferidos, denota-se a que melhor coaduna-se com a perspectiva moderna da família e do instituto da responsabilidade aquiliana. Para a realização do presente estudo monográfico, o método científico adotado foi o dedutivo, utilizando-se como principal fonte materiais bibliográficos

Hormonal regulation of mammary gland stem cells: differential role of progesterone receptor isoforms

En esta tesis se plantearon distintas estrategias para estudiar el papel de las isoformas del receptor de progesterona sobre la población de células madre de la glándula mamaria normal y tumoral. Para ello se utilizaron dos modelos: ratones transgénicos que sobre expresan la isoforma A (PR A) o B (PR B) del receptor de progesterona (PR), y la línea celular de cáncer de mama humano, T47D, y sus derivados T47D YA y T47D YB que expresan PR A y PR B respectivamente. Demostramos que tanto las glándulas mamarias de ratones transgénicos, como células de cáncer de mama humano T47D que sobre expresan PR B presentan mayor porcentaje de células positivas para marcadores de células madre. En los ratones, la ovariectomía llevó a una disminución en el porcentaje de células progenitoras luminales tanto en glándulas mamarias de ratones wild type como de transgénicos PR A, sin afectar a la población madre/progenitora basal. Por otra parte, ensayos con los anti estrógenos Fulvestran y Tamoxifeno demostraron que las células que sobre expresan PR B presentan resistencia a ambos tratamientos, mientras que aquellas con un incremento en la expresión de PR A son sensibles a los mismos. En el modelo tumoral la expresión de PR B se asoció a un fenotipo más maligno evaluado por la formación de mamoesferas de mayor tamaño, más irregulares, con mayor capacidad clonogénica y resistentes a terapias endocrinas. Los resultados obtenidos en este trabajo revelan que el balance adecuado en la expresión de las isoformas del PR es indispensable para mantener la homeostasis de la población de células madre mamarias, y que impacta también a esta población celular en el contexto tumoral. En particular, PR B jugaría un papel fundamental, indicando la relevancia de conocer si hay alteraciones en las cantidades relativas de PR A y PR B como factor de riesgo, o pronóstico al momento de una biopsia o decisión sobre una eventual terapia endocrina.In this thesis different strategies were proposed to study the role of progesterone receptor isoforms on the population of stem cells of the normal and tumor mammary gland. For this, two models were used: transgenic mice that overexpress the A (PR A) or B (PR B) isoforms of the progesterone receptor (PR), and the human breast cancer cell line, T47D, and its derivatives T47D YA and T47D YB expressing PR A and PR B respectively. We show that both the mammary glands of transgenic mice and T47D human breast cancer cells that overexpress PR B present a higher percentage of cells positive for stem cell markers. In mice, ovariectomy led to a decrease in the percentage of luminal progenitor cells in both mammary glands of wild type and transgenic PR A mice, without affecting the basal progenitor/stem cell population. On the other hand, the antiestrogens Fulvestran and Tamoxifen demonstrated that the cells that over-express PR B present resistance to both treatments, while those with an increase in the expression of PR A are sensitive to them. In the tumor model, the expression of PR B was associated with a more malignant phenotype evaluated by the formation of irregular mammospheres of larger size, with greater clonogenic capacity and resistant to endocrine therapies. The results obtained in this work reveal that the adequate balance in the expression of PR isoforms is essential to maintain the homeostasis of the mammary stem cell population, and that it also impacts this cell population in tumor contexts. In particular, PR B would play a fundamental role, indicating the relevance of knowing if there are alterations in the relative amounts of PR A and PR B as a risk factor, or prognostic factor, at the time of a biopsy or decision on an eventual endocrine therapy.Fil: Recouvreux, María Sol. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Desenvolvimento de novos biomateriais baseados em celulose bacteriana para aplicações biomédicas e de engenharia de tecidos

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2008.Membranas porosas constituídas de nanofibras de celulose bacteriana foram produzidas pela bactéria Gluconacetobacter hansenii ATCC 23769, quando cultivada em um meio de cultura apropriado e sob circunstâncias estáticas. A formação in situ dos poros foi desenvolvida com o uso de moldes adequados. As propriedades físico-químicas da membrana de celulose bacteriana, tais como o grau de cristalinidade e a deformação à tração não foram alteradas significativamente após a formação dos poros. Sugere-se que as membranas assim constituídas de microporos podem ser úteis para aplicações de engenharia de tecidos, que exigem elevadas taxas de oxigenação ou que exigem atraso da contração tecidual. Estruturas tridimensionais em forma de hidrogel de celulose bacteriana foram produzidas utilizando a bactéria G. hansenii em culturas sob condições agitadas e meio de cultivo apropriado. Estas estruturas, com geometria esferóide, elipsóide ou ovóide, são compostas por uma massa gelatinosa, em forma de "cocoon", envolvida por uma membrana densa. Hidrogéis macroscópicos tridimensionais vascularizados de celulose bacteriana foram desenvolvidos através das condições previamente descritas, utilizando-se moldes para a formação de vasos. A massa gelatinosa está envolvida por uma membrana elástica. No seu interior foram produzidos canais que podem simular vasos sanguíneos. Um compósito constituído de celulose bacteriana e acemanana foi preparado através do cultivo da bactéria G. hansenii em meio de cultivo suplementado com acemanana, um polissacarídeo proveniente da planta Aloe barbadensis Miller. Esse compósito também apresenta uma estrutura tridimensional gelatinosa, composta por nanofibras de celulose e acemanana dispersas leatoriamente, envolvido por uma densa membrana externa. O grande diferencial deste biomaterial é a incorporação da acemanana nas nanofibras de celulose, com possíveis benefícios terapêuticos da acemanana. A estrutura química da celulose favorece a síntese de hidroxiapatita na sua superfície, transformando-a num biomaterial com propriedades possíveis de promover a recuperação de tecidos ósseos e cartilaginosos. Uma estrutura hidrogel tridimensional multicamada composta de celulose bacteriana e hidroxiapatita foi produzida através de mineralização de hidroxiapatita na superfície das nanofibras de celulose. Foi observado que a hidroxiapatita foi depositada na superfície e está homogeneamente distribuída nas nanofibras de celulose. Os estudos reportados neste trabalho ampliam o potencial de aplicação da celulose bacteriana, sobretudo de biomateriais derivados da plataforma tridimensional obtida em culturas hidrodinamicamente controladas.Porous, nanofibrous bacterial cellulose membranes were produced by the bacterium Gluconacetobacter hansenii ATCC 23769. The bacterium was cultivated in an appropriate culture medium under static conditions. In situ pore formation was attained through the use of adequate pin templates. Physico-chemical properties of BC membranes, like degree of crystallinity, swelling and tensile strength were not significantly altered after pore formation. Microporous membranes could be useful for applications in repairing tissues, which require high oxygenation rates or wound contracture delay. Three-dimensional bacterial cellulose hydrogels were produced using the bacterium G. hansenii in agitated appropriate culture. The structures exhibit a rough ellipsoid geometry and are composed by a gelatinous mass involved by a denser membrane, which resembles a "cocoon". Macroscopic vascular three-dimensional bacterial cellulose hydrogels were produced by the same conditions previously described, using appropriate templates for vessels formation. The vessels, that simulate blood vessels, were formed in the inner part of the hydrogel. Three-dimensional bacterial cellulose hydrogels acemannan composite material was produced by supplementing the culture medium with acemannan, which is a polysaccharide extracted from Aloe barbadensis Miller. The composite exhibits a three-dimensional hydrogel structure composed of cellulose and acemannan fibers bonded together, random dispersed in the gel and enclosed by a dense external membrane. This new biomaterial is a potential candidate for medical applications due to the therapeutic properties of acemannan. The chemical structure of the cellulose nanofibers favors the nucleation of hydroxyapatite on their surface, which indicates the potential of cellulosehydroxyapatite composites for applications in tissue engineering for cartilaginous and bone tissue regeneration. A three-dimensional multilayer structure comprised of bacterial cellulose and hydroxyapatite was produced through mineralization of hydroxyapatite on the surface of the cellulose nanofibers. The hydroxyapatite particles were deposited and homogeneously distributed over the surface of the fibers. The studies reported in this work extend the potential of bacterial cellulose, especially of biomaterials derived from the three-dimensional bacterial cellulose based platform obtained with hydrodynamically controlled cultures

Produção de celulose bacteriana: identificação do Operon bcs e produção de biofilme celulósico por Chromobacterium violaceum

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-graduação em Engenharia Química.Exopolissacarídeos (EPS) são os principais constituintes de biofilme bacteriano. Esses polímeros, componentes da matriz extracelular bacteriana, têm despertado grande interesse em aplicações industriais e na área médica. Entretanto, têm sido associado com mecanismos de combate bacteriano. A celulose tem sido identificada como um dos EPS da matriz extracelular produzido por várias espécies de bactérias durante a formação de biofilmes. A bactéria Gram-negativa Chromobacterium violaceum, linhagem ATCC 12472, teve seu genoma recentemente seqüenciado pelo Brazilian National Genome Project Consortion. A análise do genoma da C. violaceum mostrou a presença de genes relacionados à biossíntese de celulose, até então desconhecidos. Neste trabalho, analisou-se a estrutura e organização dos genes diretamente envolvidos na biossíntese de celulose, e buscou-se evidências experimentais da presença de celulose na matriz extracelular do biofilme formado por esta bactéria. A metodologia empregada envolveu o uso de ferramentas de bioinformática que exploram informações do seu genoma, como estrutura dos genes, elementos de regulação, domínios e motivos conservados. Ensaios laboratoriais foram utilizados para se obter evidências experimentais das informações genômicas. Estas estratégias permitiram determinar a existência de um operon que compreende cinco genes estruturais codificando as proteínas e enzimas do complexo celulose sintase, como também propor uma via metabólica de biossíntese de celulose a partir de glicose. Identificaram-se ainda 43 ORFs (open reading frames) com domínio GGDEF normalmente associado à atividade de síntese de diguanilmonofosfato cíclico (c-di-GMP) a partir de duas moléculas de guanosina trifosfato (GTP). A molécula c-di-GMP funciona como um componente regulatório de diversas atividades celulares, entre elas a ativação da síntese de celulose. Experimentalmente foi analisado o produto do biofilme formado durante o cultivo de C. violaceum em meio Luria Bertani (LB), culturas estática e agitada. Os resultados obtidos sugerem a presença de celulose como componente do biofilme

A general method for manipulating DNA sequences from any organism with optical tweezers

Mechanical manipulation of single DNA molecules can provide novel information about DNA properties and protein–DNA interactions. Here we describe and characterize a useful method for manipulating desired DNA sequences from any organism with optical tweezers. Molecules are produced from either genomic or cloned DNA by PCR using labeled primers and are tethered between two optically trapped microspheres. We demonstrate that human, insect, plant, bacterial and viral sequences ranging from ∼10 to 40 kilobasepairs can be manipulated. Force-extension measurements show that these constructs exhibit uniform elastic properties in accord with the expected contour lengths for the targeted sequences. Detailed protocols for preparing and manipulating these molecules are presented, and tethering efficiency is characterized as a function of DNA concentration, ionic strength and pH. Attachment strength is characterized by measuring the unbinding time as a function of applied force. An alternative stronger attachment method using an amino–carboxyl linkage, which allows for reliable DNA overstretching, is also described

Alterations in Progesterone Receptor Isoform Balance in Normal and Neoplastic Breast Cells Modulates the Stem Cell Population

To investigate the role of PR isoforms on the homeostasis of stem cells in the normal and neoplastic mammary gland, we used PRA and PRB transgenic mice and the T47D human breast cancer cell line and its derivatives, T47D YA and YB (manipulated to express only PRA or PRB, respectively). Flow cytometry and mammosphere assays revealed that in murine breast, overexpression of PRB leads to an increase in luminal and basal progenitor/stem cells. Ovariectomy had a negative impact on the luminal compartment and induced an increase in mammosphere-forming capacity in cells derived from WT and PRA mice only. Treatment with ICI 182,780 augmented the mammosphere-forming capacity of cells isolated from WT and PRA mice, whilst those from PRB remained unaltered. T47D YB cells showed an increase in the CD44+/CD24Low/- subpopulation; however, the number of tumorspheres did not vary relative to T47D and YA, even though they were larger, more irregular, and had increased clonogenic capacity. T47D and YA tumorspheres were modulated by estrogen/antiestrogens, whereas YB spheres remained unchanged in size and number. Our results show that alterations in PR isoform balance have an impact on normal and tumorigenic breast progenitor/stem cells and suggest a key role for the B isoform, with implications in response to antiestrogens.Fil: Recouvreux, María Sol. University of California at Los Angeles. School of Medicine; Estados Unidos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Díaz Bessone, María Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; Argentina. Universidad Nacional de San Martín; ArgentinaFil: Taruselli, María Agustina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; ArgentinaFil: Todaro, Laura Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Lago Huvelle, María Amparo. Universidad Nacional de San Martín; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Sampayo, Rocío Guadalupe. University of California at Berkeley; Estados Unidos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Bissell, Mina J.. Lawrence Berkeley National Laboratory; Estados UnidosFil: Simian, Marina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Oncología "Ángel H. Roffo"; Argentina. Universidad Nacional de San Martín; Argentin

RUNX1 and FOXP3 interplay regulates expression of breast cancer related genes

Runx1 participation in epithelial mammary cells is still under review. Emerging data indicates that Runx1 could be relevant for breast tumor promotion. However, to date no studies have specifically evaluated the functional contribution of Runx1 to control gene expression in mammary epithelial tumor cells. It has been described that Runx1 activity is defined by protein context interaction. Interestingly, Foxp3 is a breast tumor suppressor gene. Here we show that endogenous Runx1 and Foxp3 physically interact in normal mammary cells and this interaction blocks Runx1 transcriptional activity. Furthermore we demonstrate that Runx1 is able to bind to R-spondin 3 (RSPO3) and Gap Junction protein Alpha 1 (GJA1) promoters. This binding upregulates Rspo3 oncogene expression and downregulates GJA1 tumor suppressor gene expression in a Foxp3-dependent manner. Moreover, reduced Runx1 transcriptional activity decreases tumor cell migration properties. Collectively, these data provide evidence of a new mechanism for breast tumor gene expression regulation, in which Runx1 and Foxp3 physically interact to control mammary epithelial cell gene expression fate. Our work suggests for the first time that Runx1 could be involved in breast tumor progression depending on Foxp3 availability

Latest advances on bacterial cellulose-based materials for wound healing, delivery systems and tissue engineering

Bacterial cellulose (BC) is a nanocellulose form produced by some nonpathogenic bacteria. BC presents unique physical, chemical, and biological properties that make it a very versatile material and has found application in several fields, namely in food industry, cosmetics, and biomedicine. This review overviews the latest state-of-the-art usage of BC on three important areas of the biomedical field, namely delivery systems, wound dressing and healing materials, and tissue engineering for regenerative medicine. BC will be reviewed as a promising biopolymer for the design and development of innovative materials for the mentioned applications. Overall, BC is shown to be an effective and versatile carrier for delivery systems, a safe and multicustomizable patch or graft for wound dressing and healing applications, and a material that can be further tuned to better adjust for each tissue engineering application, by using different methods.Peer reviewe