Mould Routine Identification in the Clinical Laboratory by Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry

BACKGROUND: MALDI-TOF MS recently emerged as a valuable identification tool for bacteria and yeasts and revolutionized the daily clinical laboratory routine. But it has not been established for routine mould identification. This study aimed to validate a standardized procedure for MALDI-TOF MS-based mould identification in clinical laboratory. MATERIALS AND METHODS: First, pre-extraction and extraction procedures were optimized. With this standardized procedure, a 143 mould strains reference spectra library was built. Then, the mould isolates cultured from sequential clinical samples were prospectively subjected to this MALDI-TOF MS based-identification assay. MALDI-TOF MS-based identification was considered correct if it was concordant with the phenotypic identification; otherwise, the gold standard was DNA sequence comparison-based identification. RESULTS: The optimized procedure comprised a culture on sabouraud-gentamicin-chloramphenicol agar followed by a chemical extraction of the fungal colonies with formic acid and acetonitril. The identification was done using a reference database built with references from at least four culture replicates. For five months, 197 clinical isolates were analyzed; 20 were excluded because they were not identified at the species level. MALDI-TOF MS-based approach correctly identified 87% (154/177) of the isolates analyzed in a routine clinical laboratory activity. It failed in 12% (21/177), whose species were not represented in the reference library. MALDI-TOF MS-based identification was correct in 154 out of the remaining 156 isolates. One Beauveria bassiana was not identified and one Rhizopus oryzae was misidentified as Mucor circinelloides. CONCLUSIONS: This work's seminal finding is that a standardized procedure can also be used for MALDI-TOF MS-based identification of a wide array of clinically relevant mould species. It thus makes it possible to identify moulds in the routine clinical laboratory setting and opens new avenues for the development of an integrated MALDI-TOF MS-based solution for the identification of any clinically relevant microorganism

Netrin-1 acts as a survival factor for aggressive neuroblastoma

Neuroblastoma (NB), the most frequent solid tumor of early childhood, is diagnosed as a disseminated disease in >60% of cases, and several lines of evidence support the resistance to apoptosis as a prerequisite for NB progression. We show that autocrine production of netrin-1, a multifunctional laminin-related molecule, conveys a selective advantage in tumor growth and dissemination in aggressive NB, as it blocks the proapoptotic activity of the UNC5H netrin-1 dependence receptors. We show that such netrin-1 up-regulation is a potential marker for poor prognosis in stage 4S and, more generally, in NB stage 4 diagnosed infants. Moreover, we propose that interference with the netrin-1 autocrine loop in malignant neuroblasts could represent an alternative therapeutic strategy, as disruption of this loop triggers in vitro NB cell death and inhibits NB metastasis in avian and mouse models

Physiologie de la faim et traitements de l'obésité, autres que le nutritionnel (étude comparative chez le chien et l'homme)

LYON1-BU Santé (693882101) / SudocTOULOUSE-EN Vétérinaire (315552301) / SudocSudocFranceF

Cytochromes P450 et tonus vasculaire

Les cytochromes P450 (CYP) sont des enzymes dont le rôle principalement connu est la détoxification. Cependant leur activité peut conduire à la formation de métabolites ayant des effets pharmacologiques, toxicologiques ou physiologiques. Depuis quelques années le rôle des cytochromes P450 dans le métabolisme de l'acide arachidonique est bien décrit. Parmi les métabolites produits lors de cette biotranformation, les acides epoxyeicosatriènoïques (les EETs) et les acides hydroxyeicosatetraènoïques (les HETEs ) occupent une place importante dans la régulation du tonus vasculaire. Ainsi les EETs ont des propriétés vasodilatatrices tandis que les HETEs ont des propriétés surtout vasoconstrictrices. Au cours de ce travail, nous avons étudié l'expression de certains cytochromes P450 dans les veines saphènes humaines et nous avons caractérisé le profil d'expression de ces enzymes dans différents types cellulaires contenus dans les parois vasculaires. Nous avons montré que l'expression de la plupart des cytochromes P450 notamment CYPlBl, CYP2C, CYP2El, CYP2J2 et CYP3A était augmentée dans les échantillons de veines pathologiques humaines. Nous avons ensuite étudié dans une lignée de cellules endothéliales humaines (ECV304) et une lignée d'hépatomes d'origine humaine (HepG2), la régulation par quelques statines de certains cytochromes P450 dont les CYP2C, occupant une place importante dans la régulation de l'homéostasie vasculaire. Les statines sont des molécules utilisées dans le traitement de l'hypercholestérolémie présentant des effets pleïotropiques notamment sur l'état vasculaire. Nous avons observé que l'atorvastatine était la molécule ayant le plus d'effet sur l'expression des cytochromes P450 2C8, 2C9, 2J2, 3AS et 3A7. En effet, cette molécule diminue l'expression des différents cytochromes P450 dans les cellules ECV304 alors qu'elle augmente leur expression dans les cellules HepG2. Les statines influencent également l'expression de deux types de récepteurs nucléaires impliqués dans la régulation des cytochromes P450. Ainsi, la fluvastatine augmente l'expression des récepteurs nucléaires CAR et PXR. Enfin, nous avons étudié l'effet du polymorphisme d'un cytochrome P450 de la famille 2C sur la pression sanguine et sur les marqueurs inflammatoires des pathologies cardiovasculaires. Nous avons observé que les valeurs de pressions sanguines ne variaient pas en fonction du polymorphisme de CYP2Cl9. En revanche, les taux plasmatiques d'interleukine-6 sont plus élevés chez les porteurs de l'allèle muté de CYP2Cl9*2. De la même façon, les taux plasmatiques des paramètres lipidiques tels que les triglycérides sont également plus élevés chez les mêmes sujets. Ainsi, une modification de l'expression des cytochromes P450 peut jouer un rôle dans la pathologie variqueuse et dans la pathologie vasculaire à composante inflammatoire. Cette expression peut être modulée par les statines. Enfin, le polymorphisme CYP2Cl9*2 est corrélé avec la composante inflammatoire des pathologies variqueuses probablement par l'intermédiaire des métabolites de l'acide arachidonique. Ces résultats posent alors la question de la modulation de la production des molécules vaso-actives issues de l'acide arachidonique dans les pathologies vasculaires et d'éventuels traitements par les molécules inhibitrices de l'HMGCoA réductase ou par des inhibiteurs de cytochromes P450.NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

Les foyers à pierres chauffées de Château Blanc (Ventabren, Bouches-du-Rhône, France) et du Puech d'Auzet (Millau, Aveyron, France)

International audienceCet article traite des résultats de deux opérations d'archéologique préventive qui ont livré des foyers à pierres chauffées protohistoriques et propose une interprétation autre que celle de la cuisson d'aliment

Les foyers à pierres chauffées de Château Blanc (Ventabren, Bouches-du-Rhône, France) et du Puech d'Auzet (Millau, Aveyron, France)

International audienceCet article traite des résultats de deux opérations d'archéologique préventive qui ont livré des foyers à pierres chauffées protohistoriques et propose une interprétation autre que celle de la cuisson d'aliment

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International audienceCet article traite des résultats de deux opérations d'archéologique préventive qui ont livré des foyers à pierres chauffées protohistoriques et propose une interprétation autre que celle de la cuisson d'aliment