Immune adjuvant effect of V. cholerae O1 derived Proteoliposome coadministered by intranasal route with Vi polysaccharide from Salmonella Typhi

Proteoliposome derived from Vibrio cholerae O1 (PLc) is a nanoscaled structure obtained by detergent extraction process. Intranasal (i.n) administration of PLc was immunogenic at mucosal and systemic level vs. V. cholerae; however the adjuvant potential of this structure for non-cholera antigens has not been proven yet. The aim of this work was to evaluate the effect of coadministering PLc with the Vi polysaccharide antigen (Poli Vi) of S. Typhi by i.n route. The results showed that Poli Vi coadministered with PLc (PLc+Poli Vi) induce higher IgA response in saliva (p0.05) to that induced in a group of mice immunised by parenteral route with the Cuban anti-typhoid vaccine vax-TyVi®, although this vaccine did not induce mucosal response. In conclusion, this work demonstrates that PLc can be used as mucosal adjuvant to potentiate the immune response against a polysaccharide antigen like Poli Vi

Inmunogenicidad y eficacia de SOBERANA® 02 contra el SARS-CoV-2 en el modelo animal hámster sirio dorado

Introducción: En los estudios preclínicos de la vacuna SOBERANAÒ02, fue esencial verificar la eficacia de la respuesta inmune contra el SARS-CoV-2, en modelos animales. En un ensayo de desafío se exponen al virus, de manera controlada, animales inmunizados con el antígeno vacunal. Objetivos: Evaluar la inmunogenicidad y protección del antígeno FR02 contra el SARS-CoV-2, en el modelo hámster sirio dorado. Métodos: Los hámsteres inmunizados se retaron con la variante viral D614G. Se controló peso corporal, signos respiratorios, presencia de ARN viral en nasofaringe y tejido pulmonar. Se realizaron cultivos en células Vero E6 y análisis histopatológicos de los pulmones. Se utilizaron como controles, animales infectados sin vacunar, y animales no vacunados ni infectados. Resultados: Los hámsteres inmunizados no presentaron signos de enfermedad; tuvieron concentraciones de ARN viral en nasofaringe y pulmones inferiores a los no vacunados infectados, con reducción de la carga viral (6 logaritmos) en los pulmones, en el día del pico de replicación viral, además de no ser detectable en un 27,7 %. Se observó efecto citopático en el 5,8 % de los cultivos virales del pulmón de los animales inmunizados vs. los no inmunizados infectados, en los cuales ocurrió en el 100 %. Los hámsteres inmunizados presentaron menores índices de daño pulmonar agudo y daño histológico global. Conclusiones: La respuesta inmune generada en los animales inmunizados confirió protección contra la infección, el daño pulmonar grave y el desarrollo de la enfermedad sintomática en los hámsteres

Cuantificación de lipopolisacárido en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de Vibrio cholerae O1

El lipopolisacárido (LPS) de Vibrio cholerae O1, a diferencia de la mayoría de las bacterias gramnegativas, no es reactivo en el ensayo del KDO, un método ampliamente utilizado para la cuantificación de LPS. Este LPS puede ser cuantificado por peso seco cuando se trata del antígeno en estado puro, pero cuando se necesita cuantificarlo, por ejemplo en un proteoliposoma, se requieren métodos de hidrólisis fuerte para que la molécula de KDO se exponga y sea reactiva en el ensayo antes mencionado. En este trabajo describimos un método rápido, sencillo y reproducible que nos permite cuantificar el LPS en un proteoliposoma obtenido a partir de la superficie externa de V. cholerae O1, El Tor Ogawa, mediante el uso de un anticuerpo monoclonal anti-LPS Ogawa en Western blot y la posterior evaluación del perfil reactivo en un densitómetro, utilizando LPS Ogawa purificado y cuantificado por peso seco como patrón de referencia. Este método puede ser aplicado a cualquier otra preparación que contenga LPS y que no pueda ser evaluada por KDO

Estandarización de ensayos inmunoenzimáticos (ELISA) para la cuantificación de anticuerpos IgG inducidos por una vacuna de vesículas de membrana externa de los serogrupos A y W135 de Neisseria meningitidis

La enfermedad meningocócica es una afección invasiva, de amplia incidencia mundial, cuyo agente causal es la bacteria gramnegativa Neisseria meningitidis . Existen vacunas polisacarídicas sin conjugar o conjugadas, contra cuatro de los cinco serogrupos responsables del 95% de los casos en el mundo. Para el serogrupo B, cuyo polisacárido es pobremente inmunogénico, se han evaluado varios candidatos vacunales producidos a base de vesículas de membrana externa. La determinación de la actividad bactericida y la cuantificación de IgG por ELISA han sido los métodos más utilizados en la medición de la respuesta inmune generada por vacunas contra la meningitis meningocócica. El segundo de estos métodos es utilizado en el Instituto Finlay como ensayo de inmunogenicidad para la liberación de lotes de VA-MENGOC-BC®. Como parte de una colaboración con investigadores noruegos, se trabaja en la obtención de un candidato vacunal contra los serogrupos A y W135 , basado en vesículas de membrana externa. En el presente trabajo se describe la estandarización de un ELISA para ser utilizado en la evaluación de la respuesta inmune del candidato vacunal bivalente

Purificación de lipopolisacárido de Neisseria meningitidis a partir de una fracción colateral del proceso de producción de VA-MENGOC-BC®

El trabajo tuvo como objetivo purificar lipopolisacáridos (LPS) de Neisseria meningitidis a partir de una fracción colateral del proceso de producción de la vacuna antimeningocócica VA-MENGOC-BC®, el sobrenadante que se obtiene del paso de ultracentrifugación durante el proceso de extracción de las proteínas de membrana externa del meningococo. La purificación se realizó mediante precipitación con etanol al 80%, extracción de las proteínas con fenol al 90% entre 65-70 ºC y ultracentrifugación fraccionada a 105,000 g. Se obtuvieron tres lotes de LPS, en total 1,069 g, con un contenido de proteínas, ácidos nucleicos y ácido sálico respecto al LPS de 0,5%, 0,3% y 2,2% (m/m) respectivamente. La evaluación por cromatografía mostró una alta integridad molecular, con valores de constante de distribución reproducibles (0,36-0,38) y una posible asociación del ácido siálico al LPS. Se apreció homogeneidad en el perfil electroforético de los tres lotes y alta actividad endotóxica. El LPS purificado fue identificado fundamentalmente como del inmunotipo L3,7,9. El procedimiento de purificación empleado permite aprovechar una fracción colateral del proceso de producción de la vacuna, es escalable, no incluye métodos cromatográficos, y posibilita la obtención de gran cantidad de LPS de Neisseria meningitidis, no disponible en el mercado, con elevada pureza y alta actividad endotóxica

Estandarización de un ELISA para la cuantificación de anticuerpos IgG humanos contra células enteras de Bordetella pertussis

Bordetella pertussis es un patógeno exclusivo de humanos que causa la tos ferina, enfermedad respiratoria aguda que afecta principalmente a la población pediátrica. Existen dos tipos de vacunas comercializadas contra este patógeno: celulares y acelulares. Las vacunas celulares han sido extensamente utilizadas y siguen teniendo gran relevancia. El presente trabajo tuvo como objetivo la estandarización de un ELISA para la cuantificación de anticuerpos IgG contra células enteras de Bordetella pertussis. Para ello se determinó la concentración de recubrimiento, el rango lineal de la curva, los parámetros de precisión intra e interensayo, la especificidad, el valor de corte y el límite de detección. Se determinó como concentración de recubrimiento 0,5 UO/mL de células enteras. La curva estándar utilizando un suero de referencia internacional presentó un buen ajuste a una función polinómica en un intervalo entre las diluciones 1/100 y 1/24.300 con un coeficiente de correlación R2≥0,98. Los coeficientes de variación en los ensayos de precisión intra e interensayo estuvieron en los intervalos establecidos para cada uno (≤10%, ≤20% respectivamente). Los resultados obtenidos avalan el empleo de este ELISA cuantitativo para la evaluación de la respuesta a células enteras de Bordetella pertussis en ensayos clínicos

Toxicidad a dosis repetida e inmunogenicidad en Cercopithecus aethiops, del candidato vacunal SOBERANA 01(FINLAY-FR-01) contra el coronavirus de tipo 2 causante del síndrome respiratorio agudo severo

En el Instituto Finlay de Vacunas se desarrolló el candidato vacunal SOBERANA 01 (FINLAY-FR-01) contra el coronavirus de tipo 2 causante del síndrome respiratorio agudo severo. Este trabajo tuvo como objetivo evaluar la inmunogenicidad y posibles efectos toxicológicos del candidato vacunal SOBERANA 01 (FINLAY-FR-01 en Cercopithecus aethiops. Se utilizaron cinco primates no humanos (hembras), de 1-3 años de edad y 1-4 kg de peso corporal, distribuidos en dos grupos experimentales: Control (Solución Salina Fisiológica) y Tratado SOBERANA 01 (FINLAY-FR-01). El estudio se extendió por 84 días, en un esquema a dosis repetida de cuatro inmunizaciones los días 0, 28, 56 y 70. Se realizaron observaciones clínicas diarias, peso corporal, signos vitales (temperatura rectal, frecuencia respiratoria, y frecuencia cardíaca), exámenes electrocardiográficos, toma de la temperatura del sitio de inyección, musculometría e irritabilidad dérmica. Fueron realizados exámenes de hematología, bioquímica sanguínea, así como estudios inmunológicos. El ensayo concluyó con una supervivencia del 100%, no se manifestaron signos de toxicidad, no hubo variaciones hematológicas, ni de la bioquímica sanguínea asociadas a la sustancia de ensayo. Además, no se observaron efectos locales en el sitio de administración. Por último, el candidato vacunal resultó inmunogénico, ya que se indujeron títulos altos de IgG anti-RBD, así como de la inhibición de la unión de RBD a ACE2

Estandarización de los métodos electroforéticos en geles de poliacrilamida en el Phast System y cromatográficos para la caracterización de nuevos antígenos vacunales y componentes de medios de cultivo

En este trabajo se realizó un análisis de diferentes parámetros que caracterizan la estandarización para la determinación del tamaño molecular de nuevos antígenos de interés vacunal, a través de electroforesis en “Phast System” y de distintas matrices cromatográficas. La evaluación electroforética de la linealidad en las curvas de patrones indicó valores de coeficientes de correlación y determinación superiores a 0,98, con una adecuada repetibilidad; no se manifestaron diferencias entre los resultados obtenidos por varios analistas, en días diferentes y el método resultó ser exacto y robusto en las condiciones recomendadas. Se evaluaron los parámetros que caracterizan la eficiencia en el empaquetamiento de cuatro matrices cromatográficas (Superosa 12, Sephacryl S-100, Sepharosa CL- 4B y Sephacryl S-1000). Los resultados obtenidos para ambos sistemas de determinación permitieron la evaluación satisfactoria de muestras de proteínas de membrana externa y lipopolisacárido, procedentes de Vibrio cholerae, Leptospira ssp, Pseudomona aeruginosa y Shigella ss